[发明专利]用于治疗半乳糖血症的基因疗法

说明书

本文提供了编码GALT蛋白的重组AAV载体。在本公开中还提供了用于治疗半乳糖血症的组合物和方法。

相关申请的交叉引用

本申请根据35 U.S.C. § 119(e)要求于2018年8月30日提交的美国临时序列号62/725,225的优先权，其全部内容通过引用合并于此。

背景

本公开总体上涉及基因疗法领域，尤其涉及半乳糖血症的治疗。

除了饮食限制含半乳糖的食物外，半乳糖血症患者目前尚无其他的治疗选择。即使严格遵守无半乳糖饮食，由于食物中含有少量半乳糖和内源性产生的半乳糖，许多患者仍患有长期的精神和身体缺陷。因此，本领域中需要有效的治疗。本公开满足了这种需求并且还提供了相关的优点。

概述

通过有效地将GALT基因传递至包括脑在内的细胞，来提供功能性GALT蛋白的持续表达并减轻疾病症状，所公开的基因疗法为半乳糖血症患者提供了持续的长期治疗选择。

为了实现该疗法，本文提供了一种多核苷酸或重组腺相关病毒（“AAV”）载体，其包含编码半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶（“GALT”）的多核苷酸序列，或基本上由其组成，或进一步由其组成。在一方面，编码GALT的多核苷酸序列包含与SEQ ID NO：1至少85％相同的核苷酸序列，或基本上由其组成，或进一步由其组成。在一方面，序列与SEQ ID NO：1至少85％相同，条件是已经从野生型序列中被修饰的核苷酸中的至少一个或多个没有从SEQ ID NO：1中被修饰（参见图4）。在另一方面，编码GALT的多核苷酸序列包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，或基本上由其组成，或进一步由其组成。在另一个实施方案中，多核苷酸序列编码SEQ ID NO：4的氨基酸序列或其等效物。

在一方面，载体是自互补载体或单链DNA（ssDNA）载体。

在一方面，重组腺相关病毒（“AAV”）包含AAV（例如侧翼为两个反向末端重复序列（ITR）的scAAV或ssAAV），或基本上由其组成，或进一步由其组成。这些ITR在序列的末端形成发夹来作为引物，从而在随后的感染步骤开始之前开始第二链的合成。第二链合成被认为是有效感染的几个阻碍之一。scAAV的其他优点包括体外和体内转基因表达的增加和延长。因此，在一方面，AAV还包含两个ITR。

用于产生载体的重组AAV骨架的非限制性实施例包括选自以下血清型的AAV载体：AAV1、AAV2、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV PHP.B或AAV rh74。在另一方面，载体骨架是AAV9血清型、rh74血清型或经修饰的AAVrh74血清型。本发明还提供一种多核苷酸，其编码包含一种或多种选自以下的修饰的经修饰的AAVrh74VP1衣壳蛋白：在AAVrh74的VP1的502位氨基酸处异亮氨酸取代天冬酰胺、以及任选地在氨基酸505处色氨酸被取代为精氨酸、以及在AAVrh74的VP1的591位氨基酸处插入肽YIG或YIGSR、或其每一个的等效物；或者至少85%相同的多核苷酸，条件是一个或多个、或两个或更多个、或三个或更多个、或四个或更多个修饰与所述经修饰的AAVrh74 VP1衣壳蛋白中的氨基酸相同；以及这些多核苷酸的互补序列。本发明还提供一种经修饰的AAVrh74 VP1衣壳蛋白，其包含一种或多种选自以下的修饰：在AAVrh74的VP1的502位氨基酸处异亮氨酸取代天冬酰胺、在氨基酸505处色氨酸被取代为精氨酸、以及在AAVrh74的VP1的591位氨基酸处插入肽YIG、或其每一个的等效物；或至少85%相同的多核苷酸，条件是一个或多个、或两个或更多个、或三个或更多个、或四个修饰与所述经修饰的AAVrh74 VP1衣壳蛋白中的氨基酸相同。