[发明专利]里氏木霉的突变株和蛋白质的制造方法

说明书

本发明涉及具有包含序列号8所示的氨基酸序列的多肽的功能缺损或降低的突变的里氏木霉的突变株，优选为进一步在选自包含序列号6、7、9、10的任一项所示的氨基酸序列的多肽中的1种以上多肽中具有下述所示的突变的突变株，使用该突变株，能够在将培养液中的培养液的粘度保持得较低的同时，生产蛋白质、特别是纤维素酶。

技术领域

本发明涉及能够将培养液的粘度保持得较低、蛋白质的制造能力提高的里氏木霉的突变株和使用该突变株的蛋白质的制造方法。

背景技术

已知里氏木霉具有高的蛋白质制造能力，一直以来进行了使用里氏木霉的蛋白质的制造的研究。里氏木霉以纤维素、乳糖、纤维二糖等作为诱导物质，在蛋白质之中特别是制造被分类为糖化酶的纤维素酶。为了强化纤维素酶制造量，自古以来对于以控制纤维素酶制造的因子的过表达、缺损为代表的基因的改变、培养条件的最适化等进行了大量研究。

另一方面，木霉属菌属于生长繁殖、蛋白质的制造需要氧的好氧性丝状菌。另外，木霉属菌具有如果在液体培养基中培养，则随着增殖而培养液的粘度提高这样的特征。如果培养液的粘度提高，则氧、营养素的分布变得不均匀，因此在培养木霉属菌时，需要搅拌培养液、增加氧供应量来防止培养中的溶解氧饱和度的降低，将其维持在一定以上。另外，如果培养槽大型化，则氧体积传递系数降低，因此为了将培养中的溶解氧饱和度保持在一定以上，需要进一步增加搅拌数、氧供应量。然而，如果增加搅拌数，则存在付与菌体以大的剪切损伤这样的课题，还存在为了增加氧供应量而需要大的能量这样的课题。

专利文献1～6中分别公开了通过使木霉属菌的Sfb3、Mpg1、Gas1、Seb1、Crz1和Tps1的蛋白质的破坏或生成减少，与突变前的亲本株相比能够以更低的搅拌数维持深层培养中的好氧性发酵时的溶解氧量。另外，专利文献7中记载，如果破坏木霉属菌的BXL1基因，则能够抑制培养液的溶解氧饱和度的降低。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本特表2013-533751号公报

专利文献2:日本特表2014-513529号公报

专利文献3:日本特表2014-513530号公报

专利文献4:日本特表2014-513531号公报

专利文献5:日本特表2014-513532号公报

专利文献6:日本特表2014-513533号公报

专利文献7:国际公开第2017/170917号

发明内容

发明要解决的课题

如上所述，使用里氏木霉进行蛋白质的制造时，抑制培养液中的溶解氧浓度的降低、将其保持在一定以上是非常重要的。本发明者们考虑，如果在使用里氏木霉利用液体培养制造蛋白质时，能够将培养液的粘度保持得较低，则即使在将培养规模大型化的情况下，也能够降低搅拌所需的能量，并能够抑制培养液中的溶解氧饱和度的降低。

因此本发明的课题是获得培养液的粘度降低的里氏木霉的突变株和提供使用该里氏木霉的突变株的蛋白质的制造方法。

用于解决课题的手段

本发明者为了特定能够将培养液的粘度保持得较低的里氏木霉的基因而进行了深入研究，结果发现，通过培养在包含序列号8所示的氨基酸序列的多肽中具有突变的里氏木霉的突变株，优选为进一步在选自包含序列号6、7、9、10的任一项所示的氨基酸序列的多肽中的1种以上多肽中具有突变的突变株，能够将培养液的粘度保持得较低，进而能够抑制培养液中的溶解氧饱和度的降低，从而完成了本发明。

即，本发明由以下(1)～(14)构成。