[发明专利]用于分割细胞块的器件、及使用其分割细胞块的方法

说明书

该器件具有膜状的主体部分1，该主体部分的膜面的规定区域成为配置有多个贯通孔20的网状结构。贯通孔具有前述的更小的细胞块所能通过的大小的开口形状，贯通孔的剩余部分为梁部30。梁部是将应分割的细胞块进行切割的部分，并且以形成网状的方式一体地相连。使应分割的细胞块与液体一同通过该器件的网状结构，从而能够分割细胞块。

技术领域

本发明涉及用于分割细胞块的器件、及使用该器件分割细胞块的方法。

背景技术

近年来，开发了使多能干细胞等各种细胞一边在液体培养基中悬浮一边三维地生长成细胞块的细胞培养方法(也被称为悬浮培养法)(例如，专利文献1等)。另外，也开发了用于适宜地实施悬浮培养法的液体培养基、及其制造方法(例如，专利文献2等)。

悬浮培养法中，存在多能干细胞的未分化性随着细胞块生长得更大而降低的可能性。例如，非专利文献1中，暗示了150μm以上的大型细胞块的未分化性降低的可能性。

另一方面，专利文献1中记载的多能干细胞的培养方法中，将多能干细胞悬浮培养至成为平均直径为约200～约300μm的大型细胞块，将得到的该大型细胞块分割成平均直径为约80～约120μm左右的更小的细胞块，然后，进一步持续悬浮培养，维持该多能干细胞并使其扩增。该培养方法中，作为用于分割大型细胞块的具体的方法，使用编入尼龙制、金属制的线材而成的筛网(mesh)，使大型细胞块通过该筛网，由此分割成与该筛网的网眼(正方形的通过孔)对应的大小的小型细胞块。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2013/077423号

专利文献2：国际公开第2016/163444号

非专利文献

非专利文献1：Andreas Elanzew等，“A reproducible and versatile systemfor the dynamic expansion of human pluripotent stem cells in suspension”,Biotechnology Journal,2015,10,1589-1599.

发明内容

发明所要解决的课题

然而，本申请的发明人对前述那样的使用了筛网的细胞块分割进行了详细研究，结果发现，存在由于筛网特有的结构而导致通过该筛网的细胞块未被适宜地分割的情况。即，筛网是一种片状物，在宏观上从正面观察其片状面时，如图10(a)所示，可见经线和纬线直线性地交叉，并且，网眼也呈现为平面性的正方形。但是，在微观上观察各个网眼时，由于将经线和纬线以绕过彼此的方式三维地编织，因此，构成围绕1个正方形的网眼100的4条边的4根线材(2根经线(101、102)、和2根纬线(111、112))如图10(b)所示，各自在筛网的厚度方向上大幅度起伏。

细胞块通过由这样的起伏的4根线材围成的网眼的情况下，各线材的截面形状为圆形，线材的主干表面为曲面，因此存在细胞块未被合适或锐利地分割的情况。为了改善这样的筛网的缺点而使用更细的线材时，筛网的强度降低。为了改善这一点而进一步提高线材的强度时，筛网变得更昂贵。另外，利用由线材形成的筛网来分割细胞块的情况下，液体培养基的流速低时，细胞块无法被切割，只是被筛网的网捕获，因此无法重复进行分割和培养，细胞块的回收率降低。因此，需要某种程度的高流速。另一方面，提高液体培养基的流速时，分割后的细胞块受到由高速流动导致的剪切从而变得更小。多能干细胞的细胞块被分割至外径40μm以下时，细胞发生凋亡等，对细胞的损伤大，不理想。

如上所述，使用了以往的筛网的细胞块分割中，液体培养基的流速低时，细胞的回收率降低，液体培养基的流速高时，对细胞块的损伤大，会导致扩大培养效率的降低。

本发明的目的在于，提供能消除上述问题、能够更适宜地分割细胞块的器件、和使用其分割细胞块的方法。