[发明专利]对肝型脂肪酸结合蛋白质进行定量的方法、其定量用试剂盒、肾疾病的检查方法、其检查试剂盒及伴随诊断药

说明书

提供了对任意样本中的L‑FABP或经氧化的L‑FABP进行定量的方法、其定量用试剂盒、基于受试者的尿中的L‑FABP或经氧化的L‑FABP的定量结果的肾疾病的检查方法、其检查试剂盒和伴随诊断药。一种对肝型脂肪酸结合蛋白质进行定量的方法，所述方法包括在进行促进抗原抗体反应的处理并且经氧化的肝型脂肪酸结合蛋白质的测定灵敏度比未经氧化的肝型脂肪酸结合蛋白质的测定灵敏度高的条件下对肝型脂肪酸结合蛋白质进行定量的工序。

技术领域

本发明涉及对样本中的肝型脂肪酸结合蛋白质进行定量的方法、其定量用试剂盒、肾疾病的检查方法、其检查试剂盒和伴随诊断药(コンパニオン診断薬)。

背景技术

肝型脂肪酸结合蛋白质(L-type Fatty Acid Binding Protein；以下也简称为“L-FABP”)存在于肝脏、肾脏的近端肾小管细胞等的细胞质中。在肾脏中，它响应于肾小管损伤引起的缺血或氧化应激，向尿中的排泄量增加(例如非专利文献1)。因此，可以基于尿中的来自肾脏组织的L-FABP蛋白质的总量的检测来进行肾疾病检查(例如专利文献1)。已知L-FABP是在两个反平行β片彼此正交而成的β桶形结构中以两个α螺旋覆盖在β桶形结构上的形式而稳定化，且与两分子的游离脂肪酸结合(例如非专利文献2)。

L-FABP通过蛋氨酸残基的氧化修饰而发生结构变化，L-FABP分子的内部区域暴露(例如非专利文献3)。已知其结果是在通过使用与L-FABP分子的内部区域结合的抗体而使用ELISA等抗原抗体反应的测定中，抗体结合能力发生变化，测定值发生很大变化。此外，据报道，该L-FABP的蛋氨酸残基的氧化修饰是通过2,2'-偶氮二2-脒基丙烷(以下简称为“AAPH”)处理、空气氧化等产生的(专利文献2～专利文献4)。

在专利文献5中公开了如下方法：在尿试样中添加由还原剂(谷胱甘肽、半胱氨酸、青霉胺等)、离液试剂(尿素、胍等)和表面活性剂(正十二烷基苯磺酸钠等)组成的化合物中的一种或两种作为变性剂，使用这些化合物对尿试样进行预处理，由此提高免疫测定的灵敏度(即作为测定对象物的尿中的蛋白质的测定灵敏度)。在专利文献5中，作为尿中的蛋白质的一例，列举了L-FABP，但没有关于L-FABP的检测的具体记载。此外，在专利文献6中公开了通过使用有机胺化合物在不引起载体粒子自发凝聚的情况下促进基于特异性反应的凝聚的方法。在专利文献7中公开了通过使苯甲脒衍生物等分子内具有NH₂-C＝N-的部分结构和环状结构的化合物与试样中的L-FABP接触来提高测定灵敏度的方法。

然而，并没有作为使用与L-FABP分子的内部区域结合的抗体来评价L-FABP的氧化状态的方法的记载。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平11-242026号公报

专利文献2：日本特许第6174778号公报

专利文献3：日本特许第6218983号公报

专利文献4：日本特许第6059388号公报

专利文献5：日本特开2014-85208号公报

专利文献6：国际公开WO2007/074860号

专利文献7：国际公开WO2016/136863号

非专利文献

非专利文献1：Kamijo，A.et al.：J Lab Clin Med，143：23-30，2004

非专利文献2：Cai，J.，et al.：Biophys J，102：2585-2594，2012

非专利文献3：Yan，J.，et al.：J Lipid Res，50：2445-2454，2009

发明内容