[发明专利]OTC构建体和载体的方法和组合物

说明书

本文中提供了与编码鸟氨酸氨甲酰基转移酶(OTC)的核酸(例如包含OTC密码子优化序列的核酸)和相关载体(例如AAV载体)相关的方法和组合物。还提供了用于与偶联于免疫抑制剂的合成纳米载体组合施用AAV载体的方法，所述AAV载体包含编码与尿素循环障碍相关的酶的序列和表达控制序列。

相关申请

本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求于2018年7月16日提交的美国临时申请序列号62/698,503和于2019年4月28日提交的美国临时申请序列号62/839,766的权益，其各自的全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及与编码鸟氨酸氨甲酰基转移酶(ornithine transcarbamylase，OTC)的核酸(例如包含OTC密码子优化序列的核酸)和相关载体(例如AAV载体)相关的方法和组合物。还提供了用于与偶联于免疫抑制剂的合成纳米载体组合施用AAV载体的方法，所述AAV载体包含编码与尿素循环障碍(urea cycle disorder)相关的酶的序列和表达控制序列(expression control sequence)。

发明概述

本文中提供了与编码OTC的核酸(例如包含OTC密码子优化序列的核酸)和相关载体(例如AAV载体)相关的方法和组合物。本文中还提供了用于与偶联于免疫抑制剂的合成纳米载体组合施用AAV载体的方法和组合物，所述AAV载体包含编码与尿素循环障碍相关的酶的核酸序列和表达控制序列。对于本文中提供的任一种方法或组合物中的本文中提供的任一个目的，施用可具有治疗益处。

在另一个方面中，提供了如任一个实施例中所描述的方法或组合物。在一个实施方案中，提供了包含本文中提供的任一种载体或核酸序列的组合物。

在另一个方面中，任一种组合物均用于所提供的任一种方法中。

在另一个方面中，任一种方法或组合物均用于治疗本文中所描述的任一种疾病或病症中。在另一个方面中，任一种方法或组合物均用于降低对AAV抗原和/或AAV载体的表达产物的免疫应答(即，体液免疫应答和/或细胞免疫应答)，提高编码所述酶的序列的表达，或者用于重复施用AAV载体。

附图简述

图1示出了三种不同构建体的转染效率。GFP质粒用于对转染效率(wt)进行归一化。

图2示出了在将每种构建体以一式两份转染时的结果。Western印迹(顶部)通过WB定量图(底部)中的带强度进行定量。

图3示出了来自所有实验(n＝4)的每种构建体的带强度。

图4示出了CO3序列的特征。

图5示出了CO21序列的特征。

图6示出了用于密码子优化分析的多种不同算法，包括密码子使用、隐蔽剪接位点、反义链中的ORF(ARF＞50bp)、二级结构、GC含量和CpG岛。

图7示出了使用实时PCR，n＝2，用pSMD2_hOTC构建体转染的Huh7细胞中的OTCmRNA表达水平。

图8A至8B示出了用pSMD2_hOTC构建体转染的HUH7中的OTC表达；示出了Western印迹分析(图8A)和带(band)定量(图8B)。

图9示出了通过染色的hOTC亚细胞定位。

图10示出了来自C57B1/6N中的AAV批次5.0E12vgp/kg的结果。测试了三种不同的构建体：AAV8-CO1、AAV8-CO3和AAV8-CO6。使用AAV8-OTC野生型作为对照。

图11示出了OTC^spf-ash小鼠(5×10¹¹Vg/Kg)实验的结果。