[发明专利]对PD-1具有提高的结合亲和力的PD-L1变体

说明书

本发明涉及对PD‑1具有提高的结合亲和力的PD‑L1变体。本发明还涉及用于制备PD‑L1变体的方法和用于筛选PD‑L1变体的方法。本发明的PD‑L1变体通过用不同的氨基酸序列取代野生型PD‑L1的一部分氨基酸序列来实现最优化，从而极大地提高对PD‑1的结合亲和力，并通过使突变位点减到最少来大大降低免疫原性产生的可能性。

技术领域

本发明涉及对PD-1具有增强的结合亲和力并因此有效抑制野生型PD-L1和PD-1之间的结合的PD-L1变体，以及制备所述变体的方法。

背景技术

治疗癌症的药物大致分为小分子药物和大分子药物。大分子药物由于其高特异性而作为治疗剂受到关注，而小分子药物由于其缺乏特异性而具有相对大的副作用。

最近在学术文献中的报告表明，阻断免疫检查点抑制蛋白，特别是PD-1和PD-L1之间的结合在癌症治疗中是有效的，并且PD-1和PD-L1比其他免疫检查点抑制蛋白引起的副作用更少(J.Naidoo等人(2015),Annals of Oncology,Lucia Gelao等人(2014)Toxins,Gorge K.Philips等人(2015),International Immunology)。

主要的医药公司，包括Bristol-Myers Squibb，已经努力通过PD-1/PD-L1免疫检查点抑制来开发治疗药物，并且正在开发用于抗癌治疗的药物，例如抗体形式的YERVOY(伊匹单抗)和OPDIVO(纳武单抗)。

因为PD-1和PD-L1不仅在癌细胞中表达，而且还在人免疫细胞中表达，抗体药物可以杀死健康免疫细胞，从而引起自身免疫疾病。

而且，作为大分子蛋白的抗体由于其体积大(150kDa)，所以很难穿透细胞。因此，需要具有突出的细胞穿透能力的治疗剂以抑制肿瘤和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)之间的PD-1/PD-L1结合。

通过之前研究中的筛选，发现了PD-L1变体。然而，这些变体具有相对低的结合亲和力并且含有许多突变，从而当在治疗药物中使用时引发了免疫原性。因此，需要开发以高亲和力结合PD-1的PD-L1变体。

提供背景技术的描述仅仅是为了更好地理解本发明的背景，而不应被认为对应于本领域技术人员已知的现有技术。

发明详述

本发明要解决的问题

本发明的发明人认真而深入地进行了研究，以发现对PD-1具有高结合亲和力并因此有效抑制野生型PD-L1和PD-1之间结合，同时使免疫原性的可能性最小化的PD-L1变体。结果，本发明发现了用其他最佳氨基酸取代野生型PD-L1序列中的一些氨基酸极大地改善了所得PD-L1变体对PD-1的亲和力，并且尽可能少的突变位点降低了免疫原性的可能性。基于该发现已经完成了本发明。

因此，本发明的一个目标是提供对PD-1具有增强的结合亲和力的PD-L1变体。

本发明的另一个目标是提供编码PD-L1变体的核酸分子。

本发明的另一个目标是提供包含核酸分子的载体。

本发明的另一个目标是提供包含载体的宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供包含变体、核酸分子或载体的组合物。

本发明的另一个目的是提供用于制备所述变体的方法。

本发明的又一个目的是提供用于筛选变体的方法。

根据本文的详细描述、权利要求书和附图，本发明的其他目标和优点将变得更加明显。

解决问题的方法

本发明的一个方面提供了对PD-1具有增强的结合亲和力的PD-L1变体。