[发明专利]使用色谱纯化蛋白质的方法

说明书

本公开文本提供了一种使用组合AEX‑CEX色谱在操作条件下以流通模式纯化蛋白质的方法，其中在所述AEX与所述CEX之间不使用自动化、工程控制和/或在线调节。所述AEX和CEX(或CEX和AEX)可以直接连接。

背景技术

大规模、高效且经济地纯化蛋白质代表当前生物技术和制药行业中要克服的主要障碍之一。通常，生产和纯化首先进行各种“上游”细胞培养过程以产生目的蛋白。生产后，采用“下游”纯化方法以将目的蛋白与也可能存在于在上游过程中产生的混合物中的任何不希望的污染物分开和分离。可以在例如在Biopharmaceutical Processing:Development,Design,and Implementation of Manufacturing Processes,Jagschies等人,2017中找到各种上游和下游技术。蛋白质、单克隆抗体(mAb)及其衍生物产物(例如Fc融合蛋白、双特异性抗体)的特定子集由于这些类型的生物制剂的安全性、功效和高品质而在治疗一些最具挑战性的人类疾病中起重要作用。mAb的制造开始于在重组哺乳动物培养物中进行蛋白质表达。然后通过直接深度过滤或离心收获细胞培养肉汤。然后使澄清的本体经受下游纯化(DSP)。下游纯化方法典型地使用蛋白A色谱进行捕获，然后进行一个或两个精制步骤，如Shukla等人,Downstream Processing Of Monoclonal Antibodies--Application Of Platform Approaches,J Chromatogr B Analyt Technol Biomed LifeSci,848(2007)28-39中所述。阳离子交换(CEX)、阴离子交换(AEX)、疏水相互作用(HIC)和混合模式色谱均已用作精制步骤。

当前的下游纯化通常以在不同单元操作(色谱和过滤器)之间用保持罐的间歇过程进行。每个单元操作通常需要必要的缓冲液调节(例如，pH或电导率调节)。据报道，洗脱物的自动化和在线调节改善纯化步骤。尽管如此，对缓冲液条件的在线调节可能是麻烦的并且增加操作成本和时间以及滑移足迹(skid footprint)。

发明内容

本公开文本涉及一种用于连续纯化目的蛋白的组合色谱方法，其中AEX和CEX以流通模式操作，而不对色谱条件(包括pH和/或电导率)进行任何在线调节。本公开文本的一个方面涉及使用AEX-CEX或CEX-AEX纯化方法纯化目的蛋白，其中不对任何纯化条件(包括pH或电导率)进行在线调节。具体地，所述方法使用以AEX-CEX或CEX-AEX顺序串联的阳离子交换色谱(CEX)和阴离子交换色谱(CEX)。在一些实施方案中，AEX和CEX不调节在AEX与CEX或CEX与AEX之间的进程内池的pH或电导率。本公开文本的另一个特征是，将AEX和CEX的柱条件一起处理并且作为单一单元操作，这大大降低了方法成本、方法操作时间和方法滑移足迹。

在一些实施方案中，所述蛋白质具有高于约6.5、约6.6、约6.7、约6.8、约6.9、约7.0、约7.1、约7.2、约7.3、约7.4、约7.5、约7.6、约7.7、约7.8、约7.9、或约8.0的等电点(pI)。在其他实施方案中，所述蛋白质具有低于约12.0、约11.9、约11.8、约11.7、约11.6、约11.5、约11.4、约11.3、约11.2、约11.1、约11.0、约10.9、约10.8、约10.8、约10.7、约10.6、约10.5、约10.4、约10.3、约10.2、约10.1、或约10.0的等电点(pI)。

在一些实施方案中，所述蛋白质具有在约7.0与约11.0之间、在约7.0与约10.0之间、在约6.5与约10.5之间、或在约7.2与约9.6之间的pI。在其他实施方案中，所述蛋白质具有约6.5、约7.0、约7.5、约8.0、约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0、约10.5、或约11.0的pI。在其他实施方案中，所述蛋白质具有低于约6.5、约6.4、约6.3、约6.2、约6.1、约5.9、约5.8、或约5.7的等电点(pI)。