[发明专利]用于测量药物产品效力的基于细胞的测定

权利要求书

1.一种用于测量转基因表达的方法，该方法包括：

a)提供第一多个终末分化神经祖细胞(NPC)；

b)用包含病毒载体的测试样品转导该第一多个终末分化NPC，该病毒载体包含编码目的蛋白的序列；

c)在足以表达该目的蛋白的条件下孵育所转导的该第一多个终末分化NPC；

d)使来自(c)的该第一多个终末分化NPC与对该目的蛋白具有特异性的分子接触；

e)对该第一多个终末分化NPC进行成像，以获得积分荧光强度/细胞(IFI-C)测定读出；并且

f)基于该IFI-C读出测定该目的蛋白的表达。

2.如权利要求1所述的方法，其中该第一多个终末分化NPC对于运动神经元存活基因(SMN1)-/-突变是纯合的。

3.如权利要求2所述的方法，其中该SMN1-/-突变包括SMN1外显子7的缺失(Δ7)。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中孵育步骤c)之后是固定和透化该第一多个终末分化NPC。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，该方法包括：

g)提供第二多个终末分化NPC；

h)用包含该病毒载体的参考标准品转导该第二多个终末分化NPC；

i)在足以表达该目的蛋白的条件下孵育所转导的该第二多个终末分化NPC；

j)使来自(i)的该第二多个终末分化NPC与对该目的蛋白具有特异性的分子接触；

k)对该第二多个终末分化NPC进行成像，以获得积分荧光强度/细胞(IFI-C)测定读出；并且

l)比较该第一多个终末分化NPC的IFI-C与该第二多个终末分化NPC的IFI-C；

从而测定该测试样品的该病毒载体相对于该参考标准品的相对效力。

6.如权利要求5所述的方法，其中该第二多个终末分化NPC对于SMN1-/-突变是纯合的。

7.如权利要求6所述的方法，其中该SMN1-/-突变包括SMN1外显子7的缺失(Δ7)。

8.如权利要求4或5所述的方法，其中孵育步骤(i)之后是固定和透化该第二多个终末分化NPC。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述第一多个终末分化NPC和所述第二多个终末分化NPC是通过使从SMN1-/-小鼠胚胎的皮层分离的神经祖细胞终末分化而产生的。

10.如权利要求9所述的方法，其中这些神经祖细胞(NPC)是通过以下方式终末分化的：

a.将这些NPC在含有表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清培养基中培养以形成神经球；

b.解离所述神经球以产生经解离的NPC；并且

c.将这些经解离的NPC在不具有生长因子的富血清培养基中培养；

从而产生终末分化NPC。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述第一多个细胞和所述第二多个细胞被该测试样品和该参考标准品在该病毒载体的至少两种不同的感染复数(MOI)下转导。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述第一多个细胞和所述第二多个细胞在该测试样品和该参考标准品中的该病毒载体的5种不同的MOI下被转导。

13.如权利要求12所述的方法，其中该5种MOI包括300,000、150,000、75,000、37,500、18,750个病毒颗粒/细胞。

14.如权利要求5-13中任一项所述的方法，其中比较步骤(l)包括针对该测试样品和该参考标准品中的每一种绘制MOI相对于IFI-C的标准曲线。