[发明专利]用于生产有机酸的微生物细胞系的分离在审
| 申请号： | 201980051169.0 | 申请日： | 2019-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN112513246A | 公开（公告）日： | 2021-03-16 |
| 发明（设计）人： | 保罗·布卢姆;桑巴西瓦·拉奥·齐古鲁帕提;德里克·杰梅恩·怀特 | 申请（专利权）人： | SP配料研发有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/00 | 分类号： | C12N1/00;C12P1/00;C12P1/02 |
| 代理公司： | 中原信达知识产权代理有限责任公司 11219 | 代理人： | 金海霞;刘慧 |
| 地址： | 美国明*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 生产 有机酸 微生物 细胞系 分离 | ||
1.一种制造和分离生产有机酸的微生物细胞系的方法，所述方法包括亲代细胞系在非固定培养中在增补有足以抑制正常微生物细胞生长的量的有机酸的培养基中的连续传代，其中所述培养基的pH值被控制在高于所述有机酸的pKa值，并且其中与所述亲代细胞系相比，所分离的微生物细胞系过量生产所述有机酸。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养基是固化的。
3.根据权利要求1所述的方法，其中在连续传代的连续迭代中以逐渐增加的量增补所述有机酸。
4.根据权利要求1所述的方法，其中在连续传代的连续迭代中以相同的量增补所述有机酸。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养基的pH值被控制在约5.5-7.5的范围内。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述培养基的pH值被控制在约6.0-7.0的范围内。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述培养基的pH被控制在约7.0。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述亲代细胞系是野生型的。
9.根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其中所述微生物细胞系来源于单细胞微生物。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述微生物细胞系来源于丙酸杆菌属(Propionibacterium)、乳酸杆菌属(Lactobacillus)、醋杆菌属(Acetobacter)、葡糖杆菌属(Gluconobacter)或梭菌属(Clostridium)。
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述微生物细胞系来源于产丙酸丙酸杆菌(P.acidipropionici)。
12.根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其中所述有机酸是丙酸、乳酸、乙酸或丁酸。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述培养基增补有约1.0％-3.0％的丙酸。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述培养基增补有约3.0％的丙酸。
15.一种根据权利要求1-14中的任一项所述的方法生产的微生物细胞系。
16.一种具有表3中鉴定的至少2种突变的微生物细胞系，优选其中所述微生物细胞系来源于丙酸杆菌属、乳酸杆菌属、醋杆菌属、葡糖杆菌属或梭菌属。
17.根据权利要求16所述的微生物细胞系，其中所述微生物细胞系具有表3中鉴定的所有突变。
18.一种微生物细胞系，其在编码表3中鉴定的蛋白或其同源物的至少2个基因中具有功能丧失突变。
19.根据权利要求18所述的微生物细胞系，其中所述微生物细胞系在编码表3中鉴定的蛋白或其同源物的所有基因中具有功能丧失突变。
20.一种微生物细胞系，其在编码选自以下的蛋白的基因中具有至少一个功能丧失突变：(1)含O抗原连接酶结构域蛋白、(2)M18家族氨肽酶、(3)氨基酸通透酶和(4)腺嘌呤糖基化酶。
21.根据权利要求20所述的微生物细胞系，其中所述至少一个功能丧失突变在编码含O抗原连接酶结构域蛋白的基因中。
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