[发明专利]通过利用内源激活诱导性胞嘧啶脱氨酶改造B淋巴细胞

权利要求书

1.用于编辑分离的B淋巴细胞的基因组的方法，包括以下步骤：

(i)激活所述B淋巴细胞的内源激活诱导性胞嘧啶脱氨酶；和

(ii)将DNA分子引入所述B淋巴细胞，所述DNA分子包括编码目标(多)肽的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法不涉及外源核酸酶和/或改造的核酸酶，如CRISPR核酸酶、锌指核酸酶、转录激活剂样核酸酶或大范围核酸酶。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述DNA分子是线性或线性化DNA分子。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述DNA分子是单链DNA分子(ssDNA)或双链DNA分子(dsDNA)。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述DNA分子是dsDNA分子。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述DNA分子具有平端或突出端。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中编码所述目标(多)肽的所述DNA分子的核苷酸序列是密码子优化的。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述DNA分子包括在编码所述目标(多)肽的核苷酸序列的上游和/或下游的内含子序列。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述内含子序列包括剪接识别位点。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述内含子序列包含Ig基因座内含子序列。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述内含子序列包括J段下游内含子的内含子序列和/或CH上游内含子的内含子序列。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述DNA分子包括剪接增强子。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述B淋巴细胞的基因组被编辑以表达修饰的免疫球蛋白链，所述修饰的免疫球蛋白链在N端至C端方向上包括：可变域、所述目标(多)肽和恒定域。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述B淋巴细胞的基因组被编辑以表达修饰的免疫球蛋白链，其中内源可变域被所述目标(多)肽替代。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述DNA分子包括在编码所述目标(多)肽的核苷酸序列上游和/或下游的编码剪切位点的核苷酸序列。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述剪切位点是T2A剪切位点。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述目标(多)肽包括病原结合域、V_H域或V_H–V_L域或由其组成。

18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述目标(多)肽包括下列或由下列组成：CD4、二肽基肽酶4、CD9、或血管紧张素转换酶2或其片段或序列变体。

19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述分离的B淋巴细胞是原代B淋巴细胞。

20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述方法包括获得改造的B淋巴细胞，其中所述B淋巴细胞的基因组包括编码所述目标(多)肽的核苷酸序列。