[发明专利]用于束缚供体DNA的修饰的核酸编辑系统

权利要求书

1.一种用于将供体DNA束缚至核酸酶的组合物，所述组合物包含核酸，所述核酸包含供体DNA和DNA结合结构域的共有序列；以及

以下的至少一种：

融合蛋白，其包含偶联至用于结合所述共有序列的DNA结合结构域的核酸酶；以及

编码所述融合蛋白的核酸。

2.权利要求1的组合物，其中所述核酸酶是Cas蛋白、转录激活物样效应子核酸酶(TALEN)、大范围核酸酶、锌指或MADzyme。

3.权利要求9的组合物，其中所述核酸酶是Cas蛋白。

4.权利要求3的组合物，其中所述Cas蛋白是Cas9。

5.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述融合蛋白进一步包含核定位序列。

6.权利要求2-5中任一项的组合物，其进一步包含与所述Cas蛋白和靶DNA序列相互作用的向导RNA。

7.权利要求1-6中任一项的组合物，其中所述共有序列包含Lac操纵子(SEQ ID NO:66)、TRP操纵子(SEQ ID NO:68)、TET操纵子(SEQ ID NO 67)、GAL-4结合位点(SEQ ID NO:1)或IHF结合位点(SEQ ID NO 2)。

8.权利要求7的组合物，其中所述共有序列包含与Lac操纵子、TRP操纵子、TET操纵子、GAL-4结合位点或IHF结合位点具有至少80％、85％、90％、95％或至少99％相同性的序列。

9.权利要求1-8中任一项的组合物，其中所述DNA结合结构域包含LAC阻遏物、TET阻遏物、TRP-阻遏物、GAL-4或IHF，或者其足以结合所述共有序列的部分。

10.权利要求1-9中任一项的组合物，其中所述DNA结合结构域是LAC阻遏物，优选SEQID NO 9的第43-403位氨基酸。

11.权利要求1-10中任一项的组合物，其中将所述核酸酶通过接头偶联至所述DNA结合结构域。

12.权利要求8的组合物，其中所述接头包含选自SEQ ID No:3-7、GGS接头或SEQ ID NO9的第404-419位氨基酸中任一个的序列。

13.权利要求1-12中任一项的组合物，其中所述融合蛋白包含LAC阻遏物和Cas9。

14.权利要求1-13中任一项的组合物，其包含载体，其中所述载体包含以下之一或两者：

a.包含供体DNA和DNA结合结构域的共有序列的核酸；以及

b.编码所述融合蛋白的核酸。

15.权利要求14的组合物，其中所述载体进一步包含编码向导RNA的核酸序列，所述向导RNA与Cas9蛋白和靶DNA序列相互作用。

16.权利要求1-15中任一项的组合物，其中所述融合蛋白是核酸酶缺陷的。

17.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求1-16中任一项的组合物。

18.一种用于在细胞中编辑DNA的方法，所述方法包括：

在适合融合蛋白与靶DNA序列相互作用的条件下使所述细胞与权利要求1-15中任一项的组合物接触。