[发明专利]BCMA-CAR-T细胞

说明书

本发明涉及一种单克隆抗人BCMA抗体，或一种单链可变片段(scFv)，该片段包含具有SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的VL。本发明还涉及一种BCMA嵌合抗原受体(CAR)，其自N‑末端到C‑末端包括：(i)本发明的单链可变片段(scFv)，(ii)跨膜结构域，(iii)至少一个共刺激结构域，和(iv)激活结构域。本发明的单克隆抗体表现出对BCMA的选择性和高亲和力结合。基于本发明所述BCMA scFv的BCMA CAR‑T细胞显著降低了动物模型中多发性骨髓瘤肿瘤的生长。

序列表、表格或计算机程序的参考

序列表以ASCII格式的文本文件通过EFS-Web与说明书同时提交，文件名为Sequence Listing.txt，创建日期为2019年3月25日，并且大小为15.9千字节。通过EFS-Web提交的序列表是说明书的一部分，并在此通过引用全文并入本文。

技术领域

本发明涉及特异性识别B细胞成熟抗原(BCMA)的特异性抗体和BCMA-CAR-T细胞，其对于肿瘤过继性免疫基因治疗领域是有用的。

背景技术

多发性骨髓瘤是一种在骨髓微环境中以浆细胞克隆性增殖为特征的癌变。多发性骨髓瘤是第二常见的血液恶性肿瘤，占美国所有血液恶性肿瘤的5-10％。尽管最近在治疗方面取得了进展，但多发性骨髓瘤仍然无法治愈且具有很高复发率，并属于难治性34疾病。

免疫疗法正在成为治疗癌症的一种非常有前途的方法。人类免疫系统的武装力量，T细胞或T淋巴细胞，不断寻找外来抗原并将异常细胞(癌症或经感染细胞)与正常细胞区分开来。利用CAR(嵌合抗原受体)结构对T细胞进行基因修饰是设计肿瘤特异性T细胞最常见的方法。将靶向肿瘤相关抗原(TAA)的CAR-T细胞输入患者体内(称为过继性细胞转移或ACT)是一种有效的免疫治疗方法[1，2]。与化疗药物或抗体相比，CAR-T技术的优点在于经重新编程的工程化T细胞能在患者体内增殖并持续存在(“活的药物”)[1，3，4]。

CAR通常由位于N-末端部分的单克隆抗体来源的单链可变片段(scFv)、铰链、跨膜结构域和若干胞内共激活结构域：(i)CD28、(ii)CD137(4-1BB)、CD27、(iii)GITR或其他共刺激结构域，与CD3ζ激活结构域串联组成(图1)[1，2]。图1中示出了CAR的演变，其从第一代(没有共刺激结构域)到第二代(具有一个共刺激结构域)到第三代CAR(具有数个共刺激结构域)。制备具有两个共刺激结构域的CAR(所谓的第三代CAR)增强了CAR-T的杀伤活性，改善了CAR-T细胞的持久性，从而增强了其抗肿瘤活性。

自然杀伤细胞，或者NK细胞，是一种先天免疫系统中至关重要的细胞毒性淋巴细胞。NK细胞在脊椎动物适应性免疫响应中发挥的作用类似于细胞毒性T细胞。NK细胞能对病毒感染的细胞作出快速的响应，大约在感染后3天起作用，并对肿瘤的形成也有响应。

B细胞成熟抗原(BCMA)是由TNFRSF17基因编码的一种细胞表面受体，又称CD269和肿瘤坏死因子受体超家族成员17(TNFRSF17)。该受体主要在成熟的B淋巴细胞和大多数多发性骨髓瘤(MM)中表达[3]。

附图说明

图1示出了CAR的结构[6]。在左侧，它示出了第一代的结构(没有共刺激结构域)。在中间，它示出了第二代的结构(一个共刺激结构域CD28或4-1BB)。在右侧，它示出了第三代CAR(两个或数个共刺激结构域)。

图2示出了BCMA蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)；胞外结构域标有下划线。

图3示出了BCMA CAR(第二代)的结构。