[发明专利]远红染料探针调配物

说明书

公开了包含远红染料探针和非线性表面活性剂或foamban的调配物，其包括液态调配物和冻干调配物。还公开了用于制备冻干远红染料探针调配物的相关方法以及相关的试剂盒和诊断产品。

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C§119(e)要求于2018年2月6日提交的临时申请号62/627,040的优先权，所述临时申请的全部内容特此通过引用并入本文。

序列表的引用

本申请含有已经以ASCII格式经由EFS-Web递交的序列表并且将此序列表通过引用以其整体并入本文。所述ASCII拷贝创建于2019年2月5日，命名为“DIA.0041-03-PCT__ST25.txt”，并且大小为5KB。

背景技术

包含远红荧光染料的探针广泛用于许多生物科学应用，包含例如体外检测测定、传统和超分辨率定位显微术以及活细胞成像。由于远红荧光染料与其它常用的荧光团和荧光蛋白的光谱重叠有限，因此其也特别便于复用。然而，由于在复原和/或以水性形式储存后荧光信号的显著损失，远红染料探针的配制存在重大挑战。

发明内容

在一方面，本发明提供了稳定的远红染料探针调配物。在一些实施方案中，所述调配物通常包含：远红染料探针，所述远红染料探针包括与载体分子缀合的远红染料；浓度大于约0.05％(v/v)的非线性表面活性剂；以及至少一种缓冲剂，其中所述调配物是水性溶液。在其它实施方案中，所述调配物通常包含：远红染料探针，所述远红染料探针包括与载体分子缀合的远红染料；浓度大于约0.05％(v/v)的foamban；以及至少一种缓冲剂，其中所述调配物是水性溶液。合适的缓冲剂是Tris；在一些此类变型中，Tris缓冲剂以约5mM到约50mM的浓度存在。特别合适的远红染料包含远红花青染料，如例如Cyanine5或Cyanine5.5。

在如上所述的包含非线性表面活性剂的稳定的远红染料探针调配物的某些实施方案中，所述非线性表面活性剂是聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯，如例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40或聚山梨醇酯60。在其它变型中，所述非线性表面活性剂是毛地黄皂甙。合适的非线性表面活性剂浓度包含约0.06％(v/v)到约20％(v/v)、约0.06％(v/v)到约10％(v/v)、约0.1％(v/v)到约20％(v/v)、或约0.1％(v/v)到约10％(v/v)的浓度。在一些实施方案中，所述非线性表面活性剂浓度为约0.5％(v/v)到约20％(v/v)、约0.5％(v/v)到约10％(v/v)、约1％(v/v)到约20％(v/v)、约1％(v/v)到约10％(v/v)或约1％(v/v)到约2％(v/v)。

在如上所述的稳定的远红染料探针调配物的一些实施方案中，所述载体分子是核酸，如例如RNA。在其它非互斥的实施方案中，所述远红染料探针进一步包含猝灭剂；在一些此类变型中，所述远红染料探针是分子炬(torch)、分子信标或TaqMan探针。在一些核酸探针实施方案中，所述调配物进一步包含第一扩增寡聚物，其中(i)其中所述远红染料探针包括特异性结合于包含在靶核酸的靶区域内的第一序列的靶杂交序列，(ii)所述第一扩增寡聚物包括特异性结合于包含在所述靶区域内的第二序列的靶杂交序列，并且(iii)所述第一扩增寡聚物被配置成在包括所述靶核酸作为模板的扩增测定中产生含有所述靶区域的扩增产物。在如上所述的进一步含有第一扩增寡聚物的一些实施方案中，所述调配物进一步包含第二扩增寡聚物，所述第二扩增寡聚物包括特异性结合于包含在所述靶区域内的第三序列的靶杂交序列，其中所述第一扩增寡聚物和第二扩增寡聚物被配置成在所述扩增测定的多个循环中扩增所述靶区域。在进一步含有第一扩增寡聚物的调配物的一些变型中，所述第一扩增寡聚物是基于启动子的扩增寡聚物，其进一步包括位于第一靶杂交序列的5'的启动子序列。如上所述的包括核酸远红染料探针并进一步含有第一扩增寡聚物的调配物可进一步包含一种或多种适于进行扩增测定的另外的组分，例如一种或多种核苷酸三磷酸和/或一种或多种盐或辅因子。