[发明专利]在植物体中基于同源重组提高基因编辑效率的方法

权利要求书

1.一种在植物体中基于同源重组提高基因编辑效率的方法，其作为利用基因剪刀系统的植物体的基因编辑方法，其特征在于，包括在植物细胞的组织培养过程中优化温度及光周期条件的步骤，上述组织培养的温度条件为在共培养植物组织后，在29～33℃的条件下培养4～6天后，在26～30℃的条件下培养4～6天，上述组织培养的光周期条件为由6～10小时的明期及14～18小时的暗期组成的短日照条件。

2.根据权利要求1所述的在植物体中基于同源重组提高基因编辑效率的方法，其特征在于，还包括利用多复制子、调节同源介导的双链DNA修复途径或非同源末端连接途径的步骤。

3.根据权利要求2所述的在植物体中基于同源重组提高基因编辑效率的方法，其特征在于，上述复制子为基于双生病毒的复制子。

4.根据权利要求2所述的在植物体中基于同源重组提高基因编辑效率的方法，其特征在于，上述调节同源介导的双链DNA修复途径为调节选自由RPA1A、RPA1B、RPA1C、RPA1D、RAD51B、RAD51C、RAD51D、RAD51、DMC1、RAD52-1、RAD52-2、RAD54、XRCC1、XRCC2、XRCC3、ATM、XRS2/NBS、Mre11、rad50、Brca1、Brca2A、Brca2B、CtlP/Com1/Sae2及exo1组成组中的一种以上的表达或通过处理同源介导的双链DNA修复途径的激活剂来激活同源介导的双链DNA修复的途径。

5.根据权利要求2所述的在植物体中基于同源重组提高基因编辑效率的方法，其特征在于，上述调节非同源末端连接途径为调节选自由KU70、KU80及LIG4组成的组中的一种以上的表达或通过处理非同源末端连接途径的抑制剂来抑制非同源末端连接途径。

6.根据权利要求2所述的在植物体中基于同源重组提高基因编辑效率的方法，其特征在于，上述基因剪刀系统包含选自由CRISPR相关蛋白9、Cpf1、转录激活因子样效应物核酸酶、锌指核酸酶或它们功能上的类似物组成的组中的一种以上的核酸水解酶及能够向所要编辑的靶基因组位置诱导上述核酸水解酶的向导RNA作为有效成分。

7.根据权利要求6所述的在植物体中基于同源重组提高基因编辑效率的方法，其特征在于，由序列表中序列1的碱基序列组成的拟南芥端粒重复序列结合蛋白1内含子插入于上述核酸水解酶中。