[发明专利]一种密码子优化的人胰岛素类似物前体基因和信号肽基因

权利要求书

1.核酸分子，其包含具有以下通式的分子或结构：

5′—（PS）_a—（SP）_b—（LS）_c—GE—（P′S）_d—3′，

其中，

PS是编码加工位点的核酸分子，所述加工位点是连接酶切位点，a是0或1；

SP是编码信号肽的核酸分子，b是1；

LS是编码间隔肽的核酸分子，c是1，所述编码间隔肽的核酸分子包含如SEQ ID NO:5所示序列；

GE是编码目标多肽的核酸分子；

P′S是编码加工位点的核酸分子，所述加工位点是连接酶切位点，d是0或1；

所述编码信号肽的核酸分子包含如SEQ ID NO:1所示序列；

所述目标多肽是人胰岛素类似物前体，编码所述人胰岛素类似物前体多肽的核酸分子包含如SEQ ID NO:3所示序列。

2.根据前述权利要求1所述的核酸分子，其包含如SEQ ID NO:8所示序列。

3.根据前述权利要求1或2所述的核酸分子，所述PS是编码EcoR I酶切位点的核酸分子和/或P′S是编码Not I酶切位点的核酸分子。

4.载体，其包含如权利要求1至3任一项所述的核酸分子。

5.根据前述权利要求4所述的载体，所述载体是真核细胞表达载体或原核细胞表达载体。

6.宿主细胞，其含有权利要求1至3任一项所述的核酸分子和/或权利要求4或5所述的载体，其中所述宿主细胞为毕赤酵母。

7.制备人胰岛素类似物的方法，包括使用权利要求1至3任一项所述的核酸分子，权利要求4至5任一项所述的载体，和/或权利要求6所述的宿主细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其还包括如下步骤：

1）表达人胰岛素类似物前体；

2）酶切步骤1）获得的人胰岛素类似物前体，得到人胰岛素类似物。

9.根据权利要求7或8所述的方法，所述的人胰岛素类似物为B30缺失的人胰岛素。

10.根据权利要求9所述的方法，所述的人胰岛素类似物进一步经过酰化基团的取代。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述取代是B29位的赖氨酸被取代。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述取代的产物为赖氨酸B29 (N^ε-(N^α-十六烷脂肪二酸-L-赖氨酸-N^ε-氧代丁酰基))des(B30)人胰岛素。