[发明专利]一种二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供了一种二联灭活疫苗，含灭活的猪圆环病毒2型Cap蛋白和猪肺炎支原体，所述Cap蛋白编码基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述猪肺炎支原体保藏号为：CGMCC No.18879。解决了猪圆环病毒2型和猪肺炎支原体已知疫苗的毒株地域性、疫苗灭活剂及佐剂等问题。本发明提供的二联灭活疫苗，含灭活的猪圆环病毒2型Cap蛋白和猪肺炎支原体，能够提供更简单、有效、低成本的预防和控制猪圆环病毒和猪肺炎支原体感染引起的疾病。

技术领域

本发明属于疫苗制备领域，具体涉及一种猪圆环病毒2型和猪支原体肺炎的疫苗。

背景技术

猪圆环病毒2型（Porcine circovirs type 2，PCV2）是断奶仔猪多系统综合征(Post-weaning MμLtisystemic Wasting Syndrome，PMWS)、猪呼吸道病综合征(PorcineRespiratory Disease complex，PRDC)和猪皮炎和肾病综合征(Porcine Dermatitis andNepHropathy syndrome，PDNS)的主要病原之一。PCV2属于圆环病毒科圆环病毒属，是一种无囊膜，单链DNA病毒。PCV2主要有PCV2a，PCV2b，PCV2c，PCV2d和PCV2e共5个基因型，近几年，PCV2d变为主要传染的基因型。Cap蛋白由病毒基因组中ORF2开放阅读框编码，是主要的结构蛋白，构成病毒的核衣壳，Cap蛋白是主要的结构蛋白，研究表明其N端含有一个由41个氨基酸残基组成的核定位信号(NLS)，且含有大量的大肠埃希菌稀有密码子，这将严重影响外源蛋白的表达。相关研究证实，Cap蛋白免疫动物可以产生病毒的中和抗体。ORF2基因已经作为研制基因工程疫苗的重点对象。但是，现有技术中Cap蛋白采用真核表达系统产量低，分离纯化困难；而ORF2编码蛋白的N端存在着大量串联或单联的大肠埃希氏菌稀有密码子，严重影响在大肠杆菌中的表达，所以目前报道进行原核表达的多为截短型Cap蛋白，这样虽然蛋白表达量较高，但不是完整的Cap蛋白，不能形成完整的病毒样颗粒，同时一些功能性信号区域和保守序列没能表达。对ORF2基因进行密码子优化，改变了难以在大肠杆菌中表达的稀有密码子，极大地提高了蛋白的表达量，同时表达的完整Cap蛋白氨基酸序列和亲本序列完全一致，没有改变其免疫原性，为保证制备的疫苗免疫效果打下良好的基础。

PCV2对猪的致病性主要表现为免疫系统的损伤，可引起淋巴结肿大、淋巴细胞减少等病变，使感染猪处于严重免疫抑制状态，这是PMWS发生的重要原因。

猪支原体肺炎（MPS）又称猪喘气病或地方性流行性肺炎，是由猪肺炎支原体（Mhp）引起的一种接触性慢性呼吸性传染病。不同年龄不同品种的猪均能感染。患病猪主要表现为咳嗽和气喘，剖解时以肺部病变为主，出现“肉变样”或“胰变样”等实质性病变。有报道成猪肺炎支原体感染后可引起动物机体免疫抑制，造成其抵抗力下降而招致继发感染。对PCV2而言，它会增加它的病毒载量，病延长病毒在动物体内存在的时间，协同其促进肺部和淋巴病变，从而提高PMWS的发生率。

临床调查显示，猪圆环病毒和猪支原体肺炎的混合感染极为广泛，发病率严重，给养猪业造成了严重的经济损失。疫苗接种是防治猪圆环病毒和猪支原体肺炎的重要方法。

为了更简单、有效、降低成本的预防和控制猪圆环病毒和猪肺炎支原体感染引起的疾病，我们研制了猪圆环病毒2型、猪支原体肺炎二联灭活疫苗（BL21/pET30a-ORF2株+ Q株），研究其安全性与有效性指标。

发明内容

针对猪圆环病毒2型和猪肺炎支原体已知疫苗的毒株地域性、疫苗灭活剂及佐剂等问题，本发明提供一种预防猪圆环病毒2型和猪支原体肺炎有效的疫苗，本发明的疫苗在受试者中诱导针对猪圆环病毒2型和猪肺炎支原体攻击的保护性免疫应答。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种二联灭活疫苗，含灭活的猪圆环病毒2型Cap蛋白和猪肺炎支原体，所述Cap蛋白编码基因序列如SEQ ID NO. 1所示，所述猪肺炎支原体保藏号为：CGMCC No. 18879。