[发明专利]间充质干细胞复合活性因子冻干粉及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种间充质干细胞复合活性因子冻干粉及其制备方法和应用。本发明的复合活性因子冻干粉在制备过程中对细胞培养容器使用特定的预包被液处理，并采用第一培养基和第二培养基在特定的培养条件下培养间充质干细胞，使得间充质干细胞饥饿培养和诱导过程中仍然能维持细胞的正常状态，并分泌更多的活性因子。本发明制备得到的复合活性因子冻干粉能促进细胞的分裂与增殖，修复受损或先天角质层薄的皮肤，还可以达到紧致肌肤，减少皱纹；并激活皮肤的免疫调节功能，促进皮肤的新陈代谢，发挥抗衰老的作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及间充质干细胞复合活性因子冻干粉及其制备方法和应用。

背景技术

间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是一类来源于出生前胚胎发育阶段的中胚叶和外胚层，存在于多种组织器官，如骨髓、脂肪组织、肌肉组织、肺、肝脏、胰腺和滑膜等。MSCs具有多向分化能力和旁分泌作用，其在不同的诱导因子作用下可以向脂肪细胞、软骨细胞、城固细胞等分化；还能够分泌多种细胞因子，包括趋化因子、粘黏附分子等，近年来，研究表明干细胞分泌的各种生物活性因子，可以作为一种新型的无细胞生物调控模式促进或完成细胞间的信号传导，从而响应机体生理或病理状态的变化，以此对机体内环境的稳定发挥重要的调控作用。

目前，间充质干细胞复合活性因子是将间充质干细胞在特定培养基和诱导条件下培养，取上清液纯化浓缩得到。然而大多数培养基均含有市售的胎牛血清或者是人体不适用的化学组分，例如胎牛血清可能会携带未知病原体或者朊病毒蛋白等异种蛋白，一旦进入人体很可能会导致感染、过敏等不良事件，风险性高，且这些成分在提取、纯化、浓缩过程中并不能完全去除，因此在临床应用上具有非常大的限制性。除此之外，间充质干细胞复合活性因子含量低也是培养过程中存在的重要问题。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本发明提供了一种间充质干细胞复合活性因子冻干粉的制备方法，该方法使得间充质干细胞在饥饿培养和诱导过程中仍然能维持细胞的正常状态，可以促进间充质干细胞分泌更多的活性因子。

本发明还提供一种上述制备方法制备得到的复合活性因子冻干粉，该冻干粉富含活性因子、氨基酸和维生素等物质，能够激活皮肤的免疫调节功能，促进皮肤的新陈代谢，共同发挥抗衰老的作用。

本申请还提供了上述制备方法或上述冻干粉的应用方法，以及包含所述冻干粉的产品，例如药物、化妆品、护肤品。

具体而言，本发明所采取的技术方案是：

本发明的一方面，提供一种复合活性因子冻干粉的制备方法，包括如下步骤：

1）从样品中收集间充质干细胞，得到单细胞悬液；

2）使用第一培养基，对所述间充质干细胞进行培养，收集培养上清液，经过滤浓缩，得到间充质干细胞活性因子提取液；

3）将所述间充质干细胞活性因子提取液冻干，得到所述复合活性因子冻干粉；

其中，所述第一培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括50~500 ng/ml的肝素、1~50 ng/ml的白血病抑制因子、10~100 μg/ml的谷胱甘肽、1~50 ng/ml的碱性成纤维生长因子、1~50 ng/ml的表皮生长因子、1~50 ng/ml的胰岛素样生长因子、1~50 ng/ml的转化生长因子β1、1~50 μg/ml的重组人转铁蛋白和10~100 μg/ml的L-抗坏血酸。

根据本发明的一些实施方式，所述基础培养基选自MEM-α培养基、DMEM培养基、BME培养基或DMEM/F-12培养基；优选为MEM-α培养基。