[发明专利]间充质干细胞复合活性因子冻干粉及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种复合活性因子冻干粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）从样品中收集间充质干细胞，用第一培养基孵育，然后消化，得到单细胞悬液；

2）使用第一培养基，对所述间充质干细胞进行培养；在使用所述第一培养基培养所述间充质干细胞之后，更换为第二培养基再培养，收集培养上清液，经过滤浓缩，得到间充质干细胞活性因子提取液；

3）将所述间充质干细胞活性因子提取液冻干，得到所述复合活性因子冻干粉；

其中，所述第一培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括50~500 ng/ml的肝素、1~50 ng/ml的白血病抑制因子、10~100 μg/ml的谷胱甘肽、1~50 ng/ml的碱性成纤维生长因子、1~50 ng/ml的表皮生长因子、1~50 ng/ml的胰岛素样生长因子、1~50 ng/ml的转化生长因子β1、1~50 μg/ml的重组人转铁蛋白和10~100 μg/ml的L-抗坏血酸；

其中，所述第二培养基由以下步骤制备得到：

在使用所述第一培养基培养所述间充质干细胞之后，更换为所述基础培养基再培养，收集细胞培养上清液，得到前体诱导液；将所述前体诱导液与所述基础培养基混合，得到所述第二培养基；

所述再培养的条件均为在5℃～10℃，5%~15%O₂、其余为氮气的条件下，培养24～72 h。

2.根据权利要求1所述的复合活性因子冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤2）中，对培养所述间充质干细胞的培养容器进行预包被液处理，所述预包被液为0.5~50 μg/ml的纤连蛋白和/或0.001~0.01 g/ml的聚乙烯醇。

3.根据权利要求2所述的复合活性因子冻干粉的制备方法，其特征在于，所述预包被液为等体积混合的0.5~50 μg/ml的纤连蛋白和0.001~0.01 g/ml的聚乙烯醇。

4.根据权利要求1所述的复合活性因子冻干粉的制备方法，其特征在于，所述再培养的条件均为在10℃、5%O₂、95%氮气条件下，培养24～72 h。

5.根据权利要求1所述的复合活性因子冻干粉的制备方法，其特征在于，所述第二培养基中，所述前体诱导液与所述基础培养基的体积比为1~5:5。

6.根据权利要求1所述的复合活性因子冻干粉的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中，将所述间充质干细胞活性因子提取液与冻干赋形剂混合后冻干。

7.根据权利要求6所述的复合活性因子冻干粉的制备方法，其特征在于，所述冻干的条件为温度-50℃ ～ -30℃，真空度为1～10 Pa，时间20～45 h。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的复合活性因子冻干粉的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞选自脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、肌肉间充质干细胞或脐带间充质干细胞中的至少一种。

9.根据权利要求8所述的复合活性因子冻干粉的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞为脂肪间充质干细胞。

10.权利要求1至9中任一项所述的复合活性因子冻干粉的制备方法在制备细胞修复药物、抗皱产品、抗衰老产品中的应用。