[发明专利]一种提高外源蛋白表达量的双信号肽及其构建方法与用途

权利要求书

1.一种提高外源蛋白表达量的双信号肽组合，其特征在于：所述双信号肽组合是由氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的信号肽SP_DacB和氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的信号肽SP_amyE依次连接合成的双信号肽，

或，由氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的信号肽SP_amyE和氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的信号肽SP_DacB依次连接合成的双信号肽，

或，由氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的信号肽SP_amyE和氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的信号肽SP_L依次连接合成的双信号肽。

2.编码权利要求1所述双信号肽组合的基因。

3.权利要求1所述双信号肽组合的用途，其特征在于：由信号肽SP_DacB和SP_amyE依次连接合成的双信号肽能够提高角蛋白酶的表达量，

或，由信号肽SP_amyE和SP_DacB依次连接合成的双信号肽能够提高蔗糖异构酶的表达量，

或，由信号肽SP_amyE和SP_L依次连接合成的双信号肽能够提高果聚糖蔗糖酶的表达量。

4.如权利要求3所述双信号肽组合的用途，其特征在于：

所述角蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；所述蔗糖异构酶的氨基酸序列如SEQID NO：8所示；所述果聚糖蔗糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示。

5.一种重组载体，其特征在于：含有权利要求1所述双信号肽组合的编码基因。

6.一种宿主细胞，其特征在于：含有权利要求1所述双信号肽组合的编码基因或权利要求5所述的重组载体。

7.一种包含权利要求1所述双信号肽组合的编码基因的宿主细胞的构建方法，其特征在于：构建包含所述双信号肽组合的编码基因和外源蛋白基因的重组载体，将所述重组载体转入宿主细胞中，经过筛选得到阳性转化子。

8.一种外源蛋白的生产方法，其特征在于：将含有所述权利要求1的双信号肽组合的基因工程菌经活化后，以1.5-2.5％的接种量转接于发酵培养基中，于35-40℃、215-225r/min发酵培养15-50h。