[发明专利]精神分裂症小鼠模型前额皮层circRNA测序分析试剂盒

权利要求书

1.一种精神分裂症神经发育小鼠模型前额皮层生物标记物，其特征是，所述标记物为circRNA12、circRNA13、circRNA15、circRNA20。

2.一种权利要求1所述的精神分裂症神经发育小鼠模型前额皮层生物标记物的检测方法，其特征是，包括以下步骤：脑组织采集对照组(NC)、精神分裂症模型组(SZ)、治疗组(Treated)三组小鼠均于100天断头处死并剥离全脑。RNA抽提、建库提取样品总RNA，并使用试剂盒ribo-zero消化核糖体RNA后；加入打断试剂将RNA打断成短片段，以打断后的RNA为模板,用六碱基随机引物合成一链cDNA，然后配制二链合成反应体系合成二链cDNA，在cDNA二链合成时以dUTP代替dTTP,然后连接不同接头，再利用UNG酶法将含有dUTP的一条链进行消化，只保留连接链不同接头的cDNA一链；使用试剂盒纯化cDNA一链；纯化的cDNA一链再进行末端修复、加A尾并连接测序接头，然后进行片段大小选择，最后进行PCR扩增；构建好的文库用Agilent 2100 Bioanalyzer质检合格后，使用Illumina HiSeqTM 2500或其他测序仪测序。Real-Time PCR(RT-PCR)验证根据测序结果及标准RNA序列，设计circRNA探针及引物。依据差异倍数FC≥2、聚类分析结果中处于不同簇、每个样本均能检测出三个条件分别挑选小鼠前额皮层10个差异circRNA进行RT-RCR检测。每个circRNA样本平行重复3次。比较NC组和SZ组的表达差异是否显著，选取有显著差异的circRNA再在SZ组和Treated组样本中进行RT-PCR检测。

3.一种根据权利要求1或2所述的精神分裂症神经发育小鼠模型前额皮层生物标记物的试剂盒，其特征是，其能够测定circRNA12、circRNA13、circRNA15、circRNA20表达水平。

4.一种精神分裂症神经发育小鼠模型转归的生物标记物，其特征是，所述标记物为circRNA20。

5.一种权利要求4所述的精神分裂症神经发育小鼠模型转归生物标记物的检测方法：其特征是，取适量接受药物治疗后精神分裂症神经发育小鼠模型的前额皮层组织，从中提取总RNA，并进行正太化校正后进行逆转录反应；反应完成后进行实时荧光定量PCR，得到circRNA20表达水平。以选择经过测试在所有样本中可以稳定检测到的β-Actin作为RT-PCR实验内参，以ΔCt值(ΔCt＝Cttarget-Ctβ-actin)表示目标RNA的相对表达水平；使用FPKM法(Fragments Per kb Per Million Reads)统计目标RNA表达量；采用NB(负二项分布检验)检验目标RNA差异显著性。通过建立circRNA20表达水平的常模，得到标准数值。

6.根据权利要求4或5所述的一种精神分裂症神经发育小鼠模型转归检测的试剂盒，其特征是，其能够测定前额皮层组织中circRNA20的含量。

7.一种提供circRNA靶基因网络图及前额皮层中差异circRNA GO/KEGG富集分析结果。