[发明专利]抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用

说明书

发明人提供了一种抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体和细胞株，其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。发明人还用EDTA对幽门螺旋杆菌蛋白进行了水浴处理，并以此为免疫原对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞系13F1F6,以及由该细胞系所分泌的抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达幽门螺旋杆菌的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗幽门螺杆菌单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，简称Hp)是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌，有1-2个微小弯曲，菌体长2-4μm，宽0.5-1.0μm，只有一条环状染色体，革兰氏阴性需氧杆菌。电子显微镜下菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼，通常在粘液层下面，粘膜上皮细胞，在胃小凹内及腺腔内，呈不均匀的集团状分布。Hp是慢性胃炎、胃十二指肠溃疡的重要致病因素，与十二指肠溃疡、胃癌、胃腺癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤发生密切相关，故可用作胃部组织炎症是否Hp感染的常用诊断指标。

Hp致病机制包括：Hp的定植、毒素引起的胃黏膜损害、宿主的免疫应答介导的胃黏膜损伤以及Hp感染后胃泌素和生长抑素调节失衡所致的胃酸分泌异常等，涉及炎症、免疫、泌酸、氧化等多方面，有毒力因子、细胞因子、自由基、毒力基因等多种Hp致病因子参与。Hp毒力因子主要有尿素酶、粘附素、超黏附因子、脂多糖、磷脂酶A的过氧化氢酶。Hp感染进而引发一系列症状并不是单一的一种毒力因子作用的结果，具体的致病机制还有待进一步的阐明。Hp存在许多菌种变异，这些变异决定了细菌的毒力和致病性。最近研究认为，菌株与宿主之间的多样性是由于多株菌株感染而不是单一菌株导致宿主体内的遗传多样化(Torres J,Backert S.Pathogenesis of Helicobacter pyloriinfection.Helicobacter 2008；13Suppl 1:13-17)。对同一位点上基因多态性所导致的蛋白表达水平及活性的差异，逐渐成为Hp感染宿主临床结局的一种新解释。

数据统计显示全球约50％成年人感染Hp，另相关医学研究表明慢性活动性胃炎达到了95％的Hp感染率。Hp已被列为引起胃癌肯定的致癌原，于1994年被国际癌症研究中心列为Ⅰ类致癌物质。因此检测该菌感染具有重要的现实意义。但在相关肿瘤检测当中，在免疫组织化学上的检测尚无相关报告。本发明尝试将抗Hp单克隆抗体应用于免疫组织化学上的检测，便于病理结果的准确诊断。

发明内容

发明人提供了一种抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

优选的，所述单克隆抗体的重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列所编码。

优选的，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.16206的小鼠杂交瘤细胞系分泌。所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系13F1F6，所述细胞系的分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2018年07月30日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

优选的，所述单克隆抗体特异性识别幽门螺旋杆菌。

优选的，所述单克隆抗体为小鼠IgG_2b亚型单克隆抗体。

发明人还提供了一种抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体的制备方法，用于免疫小鼠的抗原蛋白为用EDTA缓冲液进行水浴处理的幽门螺旋杆菌全菌体蛋白。

优选的，所述EDTA缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为8.0-9.0，水浴温度为85℃-100℃。