[发明专利]检测SOS1基因突变的方法、引物和试剂盒

说明书

本发明公开了检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变的方法、引物和试剂盒，所述引物、试剂盒均包括针对SOS1基因致病突变对应显子的扩增引物和测序引物。基于PCR扩增和Sanger测序，本发明可快速地检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变位点的突变情况。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变的方法、引物和试剂盒。

背景技术

Noonan综合征(NS)是一种先天遗传性疾病，为常染色体显性遗传病，呈完全外显率，但表现度不一，而且大多数的病例属散发类型。该病由Noonan在1968年首次报道，存活的新生儿中发病率约为1/25001～1/1000，男女均可发病。该病的主要特征包括特殊面容、身材矮小、胸部畸形，并且会伴有先天性心脏病等。Noonan综合征的病理生理机制还不明确，但是目前已经确定该病与RAS/RAF/MEK/ERK信号转导通路上的部分基因突变相关，RAS/RAF/MEK/ERK信号转导通路是细胞生长的重要调控因素。其中约50％的患者出现PTPN11基因突变，10％～13％患者出现SOS1突变，另外RAF1、RIT1、RAS、NRAS、BRAF等基因突变也有出现，但患者数量较少。因此检测非PTPN11基因突变的Noonan综合征的患者可以尝试检测SOS1基因的突变。

SOS1基因定位于人的2号染色体q24.1，该基因编码一种蛋白质，该蛋白质是RAS蛋白的鸟嘌呤核苷酸交换因子，RAS蛋白是结合鸟嘌呤核苷酸并参与信号转导途径的膜蛋白。GTP结合激活，GTP水解使RAS蛋白失活。该基因的产物可通过促进GTP与GDP的交换来调节RAS蛋白。该基因的突变与4型Noonan综合征有关。该基因由23个外显子和25个内含子组成，编码的蛋白产物为1333个氨基酸长度的蛋白前体。SOS1基因突变以错义突变为主，已报到的热点突变有R552G、Q477R、P894R和I733F等。

发明内容

本发明采用Sanger测序法检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变，并且设计的引物分别扩增包含基因SOS1全外显子上的DNA片段，通过测序结果的分析，可以很直观地了解Noonan综合征相关的SOS1基因突变位点的突变情况，扩增引物设计时加上了M13接头，并使用M13作为测序引物，简化操作步骤和节约了检测成本。

本发明提供了检测SOS1基因突变的引物，其特征在于，SOS1基因突变选自R552G、Q477R、P894R、I733F突变，所述引物包括至少一对用于扩增SOS1基因的扩增引物和一对测序引物M13F和M13R，所述扩增引物选自自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R，其碱基序列为：

SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；

SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG

SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；