[发明专利]用于检测EGFR基因突变的引物Blocker组、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种用于检测EGFR基因突变的引物Blocker组、试剂盒及方法，属于基因检测技术领域。本发明提供的引物Blocker组包括引物组和与所述引物组相对应的Blocker序列，其中，引物组包括第一引物对、第二引物对、第三引物对、第四引物对、第五引物对、第六引物对、第七引物对和第八引物对中的一种或多种；Blocker序列包括第一Blocker、第二Blocker、第三Blocker、第四Blocker、第五Blocker、第六Blocker、第七Blocker和第八Blocker中的一种或者多种；另外，本发明提供的检测方法可检测EGFR基因的32种突变，每种突变对应标准曲线均可以在0.1%‑50%范围内准确定量，特别是可以明确区分0%模板和0.1%突变，其相比现有检测方法，具有高灵敏度和低成本等优点。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体是一种用于检测EGFR基因突变的引物Blocker组、试剂盒及方法。

背景技术

对于发生EGFR(Epidermal Growth Ffactor Receptor)突变的晚期非小细胞肺癌患者(NSCLC)，应用表皮生长因子受体-酪氨酸抑制剂(EGFR-TKIs)类靶向药物治疗非常有效，例如吉非替尼、埃克替尼、厄洛替尼，使用第一代和第二代TKIs发生耐药后，如检出T790M突变患者可服用第三代TKI药物奥西替尼。因此，检测EGFR基因是否突变成为肺癌病人是否使用EGFR靶向药物的前提条件，这也已经在非小细胞肺癌EGFR基因突变检测领域形成专家共识。

肿瘤释放DNA(DeoxyriboNucleic Acid)片段包含肿瘤特异性突变信息，cfDNA(cell free DNA)由于其取样方便、可无创检测，近些年越来越多地作为肿瘤标志物用于检测点突变、拷贝数变异和DNA甲基化变异。cfDNA半衰期短，约16min-13h，加上肿瘤相关ctDNA(Cell free tumor DNA)含量低，因此ctDNA检测对难度大，需要高灵敏度检测方法。

市场上低频突变基因检测技术包括ARMS(Amplification Refractory MutationSystem)、NGS(Next Generation Sequencing)(SafeSeq/CAPPSeq)和数字聚合酶链式反应(Polym erase Chain Reaction，PCR)等，但以上技术不能兼具灵敏度高、成本低和周期短优点。例如，对于ARMS技术可检测1-10％突变，不能满足cfDNA检测对于灵敏度的需求；低深度NGS技术，如SafeSeq6和CAPPseq7灵敏度可达到0.1％，但是该技术存在成本高、周期长问题；数字PCR技术灵敏度可达到0.01％，但是该技术需要合成Taqman探针、并且需要购置数字PCR仪，成本高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测EGFR基因突变的引物Blocker组，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

一种用于检测EGFR基因突变的引物Blocker组，所述引物Blocker组包括引物组和与所述引物组相对应的Blocker序列；所述引物组包括第一引物对、第二引物对、第三引物对、第四引物对、第五引物对、第六引物对、第七引物对和第八引物对中的一种或多种；所述第一引物对的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1～3所示；所述第二引物对的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:4～5所示；第三引物对的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:6～7所示；第四引物对的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:8～9所示；第五引物对的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:10～11所示；第六引物对的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:12～13所示；第七引物对的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:14～15所示；第八引物对的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:16～17所示。