[发明专利]农产品中真菌毒素污染的检测方法

权利要求书

1.农产品中真菌毒素污染的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、吸附相的制备，将沼铁矿和活性炭按照1：5的重量份比混合搅拌均匀，得到吸附相；或将沼铁矿、人工沸石、硅藻土按照1：5：2的重量份比混合搅拌均匀，得到吸附相；其中，所述人工沸石在使用前通过苄基二甲基十八烷基氯化铵水合物进行浸泡处理，浸泡时间为15~30min，使用的苄基二甲基十八烷基氯化铵水合物的质量为人工沸石的1.5倍；

将吸附相用pH值6~8的磷酸盐缓冲溶液进行预处理，将得到的吸附相压成厚度为2~5cm压片，并用微纤维滤布包裹，得到吸附相成品；将待检测的农产品的样品称重后粉碎，采用微纤维滤布将样品包覆，再将所述吸附相成品与样品夹设，得到提取样；

步骤二、将提取样用浸提液进行三次以上的浸提，每次浸泡10~15min，浸提的次数终点采用双向展开的方式对浸提后得到的浸提液进行薄层色谱检测确认，至浸提的浸提液中检测不到真菌毒素为止，合并多次浸提液后得到总提取液以及浸提后的提取样；其中，浸提液为乙腈与水按照体积比8：2的比例混合得到，浸提液质量为样品的5~10倍；

去除浸提后的提取样间的样品后得到吸附有真菌毒素的吸附相成品，采用加热后的解吸液对吸附有真菌毒素的吸附相成品进行解吸操作，解吸温度为50-60℃，得到总解吸液；所述解吸液为甲醇、乙酸和水按照重量份比95：4：1的比例混合得到，采用双向展开的方式对解吸后得到的解吸液进行薄层色谱检测，确认解吸终点；

合并所述总提取液和所述总解吸液，真空40~45℃，氮吹浓缩，再加入质量分数为50%乙腈水溶液定容，得到待测样；

步骤三、采用质量分数为50%乙腈水溶液配置呕吐毒素、黄曲霉素、赭曲霉毒素、T-2毒素、伏马菌素、玉米赤霉烯酮、镰刀菌烯醇、杂色曲霉素、展青霉素中的多种标准溶液，采用高效液相色谱和三重四级杆串联质谱联用进行标准溶液的检测，并绘制标准曲线；

步骤四、采用高效液相色谱和三重四级杆串联质谱联用进行待测样中真菌毒素的检测，并对照标准曲线得出对应的检测溶液中的真菌毒素的浓度，计算样品中的真菌毒素的含量；

步骤二中的解吸操作在解吸装置中进行，所述解吸装置包括：

解吸室，其上部开口，且开口处外壁边沿设有卡接的密封圈，所述解吸室内设有加热管，加热管外接电源；

填充漏斗，其为布氏漏斗状，且所述填充漏斗的外径略小于所述解吸室的上部开口的直径，所述填充漏斗上部边缘外翻，以将其架设在所述解吸室内，所述填充漏斗的填充层高于解吸室内解吸液的液面；

收集室，其密封盖设在所述解吸室的上部，所述收集室的底面向上凸起且端部开口，形成与所述解吸室连通的走液道，所述走液道的高度为所述收集室高度的一半以上，所述收集室的上部敞口，所述收集室的上部设有螺纹密封盖；其中，所述走液道的端部设有出液阀门座，所述出液阀门座下端和所述走液道通过螺纹固接，所述出液阀门座上活动套设有阀门盖，所述阀门盖的下端与所述出液阀门座的下端活动抵接，所述阀门盖下底面设有多个出液孔；

其中，所述收集室的侧壁最低处设有贯穿的解吸液出口，所述解吸室的侧壁最低处设有贯穿的解吸液进口。

2.如权利要求1所述的农产品中真菌毒素污染的检测方法，其特征在于，色谱条件为：色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18柱，4.6× 150mm，3.5μm;柱温30℃；进样量10µL；流动相：A为含0.03%甲酸和1mM乙酸铵水溶液；B为甲醇；梯度洗脱：0~8min.22%~36%B;8~16min，36~72%B；16~27min.72~93%B;93%B冲洗10min;每次进样前，20%B平衡柱子5min；

质谱条件为：离子源为电喷雾离子源；电离方式是ESI+；检测方式为多反应检测，毛细管电压为3.0kV；雾化器压力为40psi；干燥气流速为10L/min；干燥气温度为300℃。

3.如权利要求1所述的农产品中真菌毒素污染的检测方法，其特征在于，所述出液阀门座和所述走液道连接处设有密封环，所述解吸室与所述收集室的连接处设有密封垫圈。

4.如权利要求1所述的农产品中真菌毒素污染的检测方法，其特征在于，所述解吸液进口设有单向阀。