[发明专利]一种制备聚肌胞的方法

说明书

本发明提供了一种新的聚肌胞注射液的生产方法，属于聚肌胞生产工艺领域。本发明的方法包括如下步骤：1)将多聚肌苷酸和多聚胞苷酸分别溶解于pH值为7.0‑7.2的缓冲液，得溶液A和溶液B，分别测定其在248nm下光吸收值，溶液A的光吸收值∶溶液B的光吸收值的比值应为1.55‑1.65，若不在此范围，则调整溶液中多聚肌苷酸和多聚胞苷酸的含量，直到前述比值为1.55‑1.65；2)混合溶液A和溶液B，30分钟后，取电泳检测混合物分子量，应为1000‑1500bp，若不在此范围，则补加多聚肌苷酸或多聚胞苷酸，调整分子量到1000‑1500bp；3)在30‑35℃下保温40‑60分钟，间隙搅拌；4)过滤除菌，不再使用加热的方式进行灭菌。本发明能提高聚肌胞的合成效率，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于聚肌胞生产工艺领域。

背景技术

聚肌胞(PolVI：C)是一种人工合成的双链核糖核酸，是一种干扰素诱导剂，有抗病毒和免疫调节功能。

聚肌胞可由多聚肌苷酸(PI)和多聚胞苷酸(PC)通过化学反应络合链接而成，这也是目前聚肌胞工业生产工艺的原理。

传统聚肌胞的制备工艺的主要步骤包括：(1)分别配制PI和PC溶液，测定其在248nm下的光吸收值，当PI和PC溶液光吸收值的比值在1.55-1.65时，混合PI和PC溶液；(2)将PI和PC混合溶液置于pH7.0-7.2、温度40-45℃环境下反应30min，期间间隙性搅拌；(3)定容；(4)过滤除菌，再100℃高温灭菌30min。

传统工艺合成的聚肌胞效率较低，导致产品的实际聚肌胞含量与标示量存在较大差别，影响药效。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的聚肌胞制备方法。

本发明的技术方案包括：

一种制备聚肌胞的方法，包括如下步骤：

1)将多聚肌苷酸和多聚胞苷酸分别溶解于pH值为7.0-7.2的缓冲液，得溶液A和溶液B，分别测定其在248nm下光吸收值，溶液A的光吸收值：溶液B的光吸收值的比值应为1.55-1.65，若不在此范围，则调整溶液中多聚肌苷酸和多聚胞苷酸的含量，直到前述比值为1.55-1.65；

2)混合溶液A和溶液B，30分钟后，检测(优选的，为电泳检测)混合物分子量，应为1000-1500bp，若不在此范围，则补加多聚肌苷酸或多聚胞苷酸，调整分子量到1000-1500bp；

3)在30-35℃下保温40-60分钟，间隙搅拌；

4)过滤除菌。

进一步地，步骤1)所述缓冲液是磷酸盐缓冲液。

更进一步地，步骤1)所述缓冲液的缓冲盐是磷酸二氢钾和磷酸氢二钾。

如前述的方法，步骤1)中每L缓冲液溶解0.50～0.55g多聚肌苷酸或0.45～0.50g多聚胞苷酸。

进一步地，步骤1)中每L缓冲液溶解0.52g多聚肌苷酸或0.48g多聚胞苷酸。

进一步地，步骤3)结束后需调整混合溶液pH值在7.0-7.5范围，加水定容。

进一步地，步骤3)持续50min。

进一步地，步骤2)与3)之间还需要加入抗生素。

进一步地，抗生素为单硫酸卡那霉素。

进一步地，步骤4)中过滤除菌是使用0.22μm的滤器过滤2次。

发明人在实际生产实践中发现，传统的聚肌胞生产方法得到的聚肌胞含量不够高，原因在于：