[发明专利]一种补体H因子制备方法

说明书

本发明公开了一种补体H因子制备方法，属于血液制品领域。本发明公开的方法包括，以ATⅢ洗涤洗脱废液为起始原料制备补体H因子。包括使ATⅢ洗涤洗脱废液经过PEG沉淀富集H因子的步骤。本发明公开的技术方案中，PEG沉淀富集H因子的方法不影响后续层析步骤的试验条件，并且通过PEG预先沉淀ATIII洗涤洗脱废液可以去除一部分杂蛋白，因此可以获得纯度更高、稳定性更高的H因子。

技术领域

本发明涉及血液制品技术领域，具体涉及一种补体H因子制备方法。

背景技术

H因子(又称补体H因子，因子H)，是一个多结构和多功能的单链蛋白，分子量150kD，是H因子蛋白家族中最具特征性的一员，由20个独立的能折叠的结构域(shortconsensus repeats,SCRs)组成，而每个SCR由大约60个氨基酸组成，形成球状结构，含有四个保守的半胱氨酸残基(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)，在Ⅰ～Ⅲ和Ⅱ～Ⅳ间形成二硫键。

H因子作为补体系统的负调控因子之一，在早期的补体活化过程中起重要的调控作用。有研究表明，H因子一方面可作为I因子的共轭辅助因子促进C3b的降解(Complementfactor I:a susceptibility gene for atypical haemolytic uraemicsyndrome.Journal of Medical Genetics(2004).41(6):e84)；而另一方面可竞争性同Bb结合至C3b上，抑制C3转化酶(C3bBb)的生成，进而负调控补体系统的活化(Functionaldomains,structural variations and pathogen interactions of MCP,DAF andCR1.Atkinson.2000,49:103-116.)。除此之外，H因子包含多个结合位点的特性决定了它具有补体调控因子之外的功能，如可以作为黏附蛋白,成为细胞整合素受体CR3(CD11b/CD18)的配体，显示趋化活性(补体H因子研究进展,Foreign Medical Sciences Section ofPediatrics.2005.32(3))。

目前的研究揭示，H因子的缺陷与多种疾病的发生以及进程显著相关，比如溶血尿毒综合征(HUS)、膜增殖性肾小球肾炎(MPGN)和年龄相关性黄斑变性(ARMD)等疾病。对由于基因缺陷造成H因子减少或缺失如果施用功能性H因子可能对治疗疾病有帮助，例如：WO2014206414A1公开了H因子还可用于预防或治疗骨丢失和促进间充质细胞分化为成骨细胞；US 9248162公开了H因子还可用于预防或抑制同种异体移植物接受者的同种异体移植物排斥；KR 1020150058836A公开了H因子可用于预防或治疗含有替代途径抑制剂的肾病。尽管临床上对H因子治疗药物需求迫切，但是迄今为止尚未有H因子及其类似物的药物上市。

血浆来源的H因子或包含其的药物组合物被认为可以用作患有H因子缺陷相关疾病的患者的治疗药物；同时人血浆因为含有丰富的H因子常被来制备商业化H因子或H因子组合物。血源补体H因子纯化起始原料通常选自血液或血浆及它们的衍生部分。从血浆及它们的衍生部分分离纯化H因子的工艺陆续被公开，比如US10183976公开了一种从血浆乙醇沉淀组分Ⅰ上清中用乙醇沉淀并富集H因子的方法。US20140275496A1公开了一种从血浆乙醇沉淀组分Ⅰ沉淀中提取并用PEG沉淀的方法富集H因子的方法。US 9109044公开了一种从血浆乙醇沉淀组分沉淀物和/或级分II+III沉淀物中提取并用乙醇沉淀的方法富集H因子的工艺。CN 103153333B公开了一种从血液或血浆辛酸沉淀中纯化H因子的方法。这些方法都有一个共同的特点：改变现有血液制品比如静丙或人血白蛋白的生产工艺，开发适宜H因子生产的工艺路线，这势必对静丙或人血白蛋白的质量或者产率产生影响，进而影响吨血浆收益。血制品企业无动机牺牲高经济价值的静丙或人血白蛋白的收益转而开发H因子，因此现有技术公开的H因子工艺扩大到生产规模较困难。因此，在不显著改变现有血液制品制备工艺的情况下，开发规模化制备H因子的工艺具有重要意义。

发明内容

本发明提供一种从ATⅢ洗涤洗脱废液中制备补体H因子的方法。