[发明专利]一种发酵生产透明质酸的方法及其应用

权利要求书

1.一种发酵生产透明质酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

兽疫链球菌经活化和扩培后发酵，并在所述发酵过程中补加一次碳源，得到透明质酸发酵液，纯化后得到透明质酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透明质酸发酵液中透明质酸的含量为10-15.5g/L；

优选地，所述透明质酸的分子量为2200-4500KDa。

3.根据权利要求1-2所述的方法，其特征在于，所述碳源为葡萄糖；

优选地，每升发酵液中补加的碳源质量为10-20g；

优选地，所述补加碳源的时间为扩培后将菌种转接至发酵培养基后第4-18小时，优选为第16小时；

优选地，所述发酵时使用的发酵培养基包括50-100g/L葡萄糖、5-10g/L酵母粉、10-20g/L蛋白胨、0.5-2g/L硫酸镁、0.5-2g/L磷酸二氢钾、10-20g/L谷氨酸钠和1-5g/L精氨酸盐酸盐。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，扩培后将菌种转接至发酵培养基的转接量为3-5％；

优选地，所述发酵时搅拌速度为100-500rpm；

优选地，所述发酵温度为33-37℃；

优选地，所述发酵时间为20-24h；

优选地，所述发酵时的通气量为1-3vvm。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述发酵过程中还包括使用pH调节剂调节发酵液pH的步骤；

优选地，所述pH调节剂为氢氧化钠；

优选地，所述发酵液的pH维持在7.0-8.0之间。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述方法中活化时的温度33-37℃，时间为10-14h；

优选地，所述活化时使用的培养基为摇瓶种子培养基；

优选地，所述摇瓶种子培养基包括1-10g/L葡萄糖、5-10g/L酵母粉、10-20g/L蛋白胨、0.5-2g/L硫酸镁和0.5-2g/L磷酸二氢钾。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，所述方法中扩培时的温度为33-37℃，时间为8-12小时；

优选地，所述扩培时使用的培养基为种子罐种子培养基；

优选地，所述种子罐种子培养基包括1-10g/L葡萄糖、5-10g/L酵母粉、10-20g/L蛋白胨、0.5-2g/L硫酸镁、0.5-2g/L磷酸二氢钾和10-20g/L谷氨酸钠。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，纯化所述透明质酸发酵液使用的方法为乙醇沉淀法。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将兽疫链球菌接入摇瓶种子培养基，33-37℃下培养10-14h，转接至种子罐种子培养基，33-37℃下培养8-12h；

(2)将种子罐种子培养基中的兽疫链球菌以3-5％的接种量转接至发酵培养基中，发酵温度为33-37℃，100-500rpm搅拌，通气量为1-3vvm并维持发酵液pH为7.0-8.0；

(3)将菌种转接至发酵培养基后第4-18小时添加一次碳源，所述发酵时间共20-24小时，发酵结束后得到透明质酸发酵液，并用乙醇沉淀法纯化后得到透明质酸。

10.如权利要求1-9任一项所述的方法在制备医药级透明质酸和/或透明质酸盐中的应用。