[发明专利]一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒及其制备方法，属于免疫诊断技术领域。该试剂盒包括：含有链酶亲和素磁微粒的悬液，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液。本发明还提供一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒的制备方法。采用本方法制备的试剂盒具有较高的检测灵敏度，操作简单、定量检测准确、快速，采用顺磁性的微粒作为固相载体，其比表面积大，提高了检测的灵敏度。

技术领域

本发明属于化学发光体外诊断技术领域，涉及一种弓形虫IgM抗体检测试剂 盒及其制备方法。

背景技术

弓形虫病是一种由细胞内的原虫寄生虫(称为刚地弓形虫)所引起的广泛传 播的感染性疾病。此种疾病可感染人类及其它温血动物。弓形虫感染主要是摄 入被猫粪的成熟包囊污染的食物或水或摄入含有组织包囊的生肉引起的获得性 感染，健康个体中原发性急性感染大多症状轻微甚至无症状，常有长期持续的 潜伏感染。但是，免疫抑制者(如器官移植、AIDS患者等)潜伏弓形虫感染的 复发常诱发脑膜脑炎，弓形虫脑炎已经证实是获得性免疫缺陷综合症患者的重 要死因之一。由于弓形虫可通过胎盘传播给胎儿，因此怀孕期间原发性母体弓 形虫感染可能导致胎儿严重损害，大多数先天性感染婴儿在出生时没有临床症 状，但后来可能发展呈严重的后遗症，如智障和精神运动性阻抑、脉络视网膜 炎、大脑钙化以及听力丧失等。随着怀孕年龄增加胎儿感染率增加。但有严重 临床表现着在早期母体感染病例中较高。对妊娠期间的急性感染进行早期药物 治疗可以组止先天损害并改变临床表现的严重程度。

弓形虫病感染通常通过检测抗弓形虫特异性IgG和IgM抗体进行诊断。弓 形虫IgG抗体检测用于评价弓形虫血清学状态，反映急性或潜伏感染。弓形虫 IgM抗体检测反映急性、新近或复发弓形虫感染。

目前常用的检测弓形虫IgM抗体的方法有放射免疫分析法、酶联免疫分析 技术等，但以上方法存在诸多不足，如放射免疫分析法存在放射性污染、标记 物半衰期短、对操作者具有放射性损伤、操作繁琐、检测时间长等缺点；ELISA 具有灵敏度低、检测范围窄、检测时间长、重复性差等缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒及其制备方法，该试 剂盒检测方法灵敏，准确度高，重复性好。

本发明的首先提供一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒，该试剂盒包括：

含有链酶亲和素磁微粒的悬液，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液，生 物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液。

优选的是，所述的含有链酶亲和素磁微粒的悬液中，链酶亲和素磁微粒的 粒径为1～3μm。

优选的是，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液中，生物素与抗体标记 的摩尔比例为(1～10)：1。

优选的是，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液中，化学发光标记物与抗 原标记的摩尔比例为(1～10)：1。

优选的是，化学发光标记物为吖啶酯或吖啶酯衍生物。

优选的是，该试剂盒中还包括化学发光预激发液A液和B液；所述A液为 过氧化氢和硝酸溶液；所述B液为氢氧化钠溶液。

优选的是，该试剂盒中还包括清洗液；所述清洗液为磷酸缓冲液。

本发明还提供了上述一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒的制备方法，包括以 下步骤：

步骤一：将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后，放置在磁分离器 上，直至上清液无混浊，弃上清，留取磁颗粒，清洗后在缓冲液中配成固相试 剂，得到含有链酶亲和素磁微粒的悬液；

步骤二：取Toxo抗原，用缓冲液稀释，加入化学发光标记物进行标记，标 记反应结束后，加入封闭缓冲液，封闭后用离心管进行超滤离心，将化学发光 标记物标记的Toxo抗原重悬于缓冲液中保存；