[发明专利]一种真菌菌种鉴定的方法

说明书

本发明公开了一种真菌菌种鉴定的方法，它的流程是对真菌细胞进行细胞壁、细胞核、线粒体、内质网、高尔基体、核糖体、液泡、溶酶体、微管、鞭毛等细胞器进行观察，以细胞器的差异来区分真菌菌种。此方法可直接对真菌进行菌种鉴定，无需真菌培养，操作简单，易于自动化。

技术领域

本发明涉及的是真菌鉴定技术领域，具体的说是一种真菌菌种鉴定的方法。

背景技术

真菌界（eumycetes）是生物的一界。本界成员均属真核生物，它是真菌的最高分类阶元。真菌广泛分布于全球各带的土壤、水体、动植物及其残骸和空气中，营腐生、寄生和共生生活。

真菌种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。其营养体除少数低等类型为单细胞外，大多是由纤细管状菌丝构成的菌丝体。低等真菌的菌丝无隔膜，高等真菌的菌丝都有隔膜，前者称为无隔菌丝，后者称有隔菌丝。在多数真菌的细胞壁中最具特征性的是含有甲壳质，其次是纤维素。常见的真菌细胞器有：细胞核、线粒体、微体、核糖体、液泡、溶酶体、泡囊、内质网、微管、鞭毛等；常见的内含物有肝糖、晶体、脂体等。

不同种类真菌对药物的敏感性不同，因此真菌鉴定对真菌相关疾病的诊治具有重要意义。目前真菌鉴定的方法主要包括三大类：基于形态、基于核酸、基于代谢。基于形态的鉴定方法耗时长、易污染，基于核酸的方法场地设备要求高、费用贵，基于代谢的方法常依赖于昂贵设备（如全自动微生物鉴定仪、质谱仪等）。随着真菌疾病发病率不断提升，急需开发一种快速、低廉、易于大规模推广的真菌鉴定方法。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供了一种真菌菌种鉴定的方法，无需真菌培养，操作简单，易于自动化。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种真菌菌种鉴定的方法，它的操作过程是：对真菌细胞进行细胞壁、细胞核、线粒体、内质网、高尔基体、核糖体、液泡、溶酶体、微管、鞭毛等细胞器观察，以细胞器差异来区分真菌菌种。

可进行菌种鉴定的真菌包括真菌界内的所有真菌，即包括但不限于壶菌门真菌、芽枝霉门真菌、新美鞭菌门真菌、球囊菌门真菌、接合菌门真菌、子囊菌门真菌、担子菌门真菌。

细胞器观察可用白光显微镜、荧光显微镜、电子显微镜等仪器进行；可不经过染色处理直接观察，也可经过染色处理后进行。染色处理可用核酸探针、抗体、小分子荧光探针、纳米材料探针、非荧光类化学小分子等进行。待鉴定的真菌样本可先经过培养扩增再进行细胞器观察，也可不培养扩增而直接进行细胞器观察。

不同真菌菌种细胞器差异包括但不限于在同一观测条件下有无同一个细胞器、同一细胞器的大小\形状\位置\颜色\数量\密度\分布\亮度\对比度是否一致、不细胞器的相对大小\形状\位置\颜色\数量\密度\分布\亮度\对比度是否一致。

本发明的有益效果为：提供了一种无需真菌培养、操作简单、易于自动化的真菌菌种鉴定新方法。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本具体实施方式采用以下技术方案：

将钙荧光白、CYP51（Cytochrome P450 51）蛋白染色剂、细胞核蛋白染色剂混合，形成染色液。由于钙荧光白可显示真菌细胞壁，CYP51蛋白染色剂可显示真菌线粒体和内质网，细胞核蛋白染色剂可显示真菌细胞核，因此混合的染色液可显示真菌的细胞壁、细胞核、内质网、线粒体。