[发明专利]一种戊糖片球菌Z-1、戊糖片球菌细菌素Z-1及戊糖片球菌细菌素Z-1的生产方法

说明书

综上，本发明公开了一种戊糖片球菌Z‑1、戊糖片球菌细菌素Z‑1及戊糖片球菌细菌素Z‑1的生产方法。戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）Z‑1的菌种保藏编号为(CGMCC NO.17820)，该菌株从浙江金华传统火腿中分离得到，其能够在MRS培养基里发酵产生一种新型的细菌素，新型细菌素通过两步纯化方式最后经鉴定得到。本发明提供的细菌素可抑制食品中其他常见的革兰氏阳性细菌、阴性菌，同时对热及pH稳定，可以被蛋白酶降解，因此安全性较高，不会在人体内残留，可作为食品防腐剂和抗菌剂而应用于食品和医药领域。整个工艺过程操作方便，能耗低，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种戊糖片球菌Z-1、戊糖片球菌细菌素Z-1及戊糖片球菌细菌素Z-1的生 产方法,属于食品微生物领域。

背景技术

乳酸菌作为世界公认的食品级微生物，其在食品工业中已得到广泛应用。乳酸菌细菌素 是乳酸菌生长代谢产生有抑菌活性的蛋白或多肽类物质。乳酸菌细菌素具有抑菌谱广、在人 体内无残留、能作为天然防腐剂等优点而倍受国内外研究者的广泛关注。其中乳酸链球菌素 (Nisin)已广泛应用于食品工业中，但随着研究的深入，发现Nisin存在抑菌能力不稳定、 抑菌谱窄、抑菌时效短等诸多不足，限制了其在食品防腐领域的应用，寻找应用范围广的新 型生物防腐剂已经成为食品防腐领域的研究热点之一。

金华火腿是我国典型的传统发酵肉制品，研究报道不同地区的金华火腿中微生物菌群均 具有较高的丰富度和多样性，蕴含丰富的发酵微生物，其中优势菌属包括葡萄球菌属 (Staphylococcus)、普氏菌属(Prevotella)和丙酸菌属(Propionibacterium)等，目前，从金华火腿中筛选产细菌素乳酸菌的研究未见报道。

为了获得高纯度的细菌素，首先需要将细菌素从无细胞发酵液中提取出来，细菌素的提 取方法有很多，根据细菌素自身的特性，提取的方法主要有超声破壁法、酸沉淀法、等电点 沉淀法、微波法等。目前，常用的细菌素提取方法主要有硫酸铵盐析法、有机溶剂萃取法和 菌体吸附法。溶剂萃取法和盐析沉淀法易造成有机溶剂或重金属残留，且易降低细菌素活性、 且不利于后期的分离纯化。

其次，需要将杂蛋白去除，由于乳酸菌代谢产生的抑菌物质比较复杂，甚至还包含很多 的未知成分，且不同乳酸菌代谢的抑菌物质不同，所使用的纯化方法也不尽相同。但所有细 菌素分离纯化的方法都是基于细菌素的自身性质，如带电性、分子量等。目前细菌素纯化的 方法多采用凝胶过滤色谱、离子交换层析、反相高效液相色谱等技术相结合进一步纯化，去 除其中大量杂质，从而提高细菌素样品的纯度。

虽然国内外对不同来源的乳酸菌产细菌素研究较多，但在食品工业中实际应用较少，究 其原因是其中一些细菌素抑菌谱窄、抑菌效果不稳定。因此，充分利用我国金华火腿中的微 生物资源，筛选出新型产细菌素的乳酸菌，分离纯化出抑菌范围广、抑菌效果稳定的新型乳 酸菌细菌素，具有十分广阔的前景和价值。

发明内容

本发明的目的在于为了克服以上现有技术的不足，目的之一提供一株具有广谱抑菌活性 的戊糖片球菌；目的之二在于提供该菌株所产细菌素的制备方法。

本发明是由以下技术手段实现的：一种戊糖片球菌Z-1，其特征在于，一株戊糖片球菌 Z-1(Pediococcus pentosaceus)的保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期为：2019年5月16日；保 藏编号为17820。

一种戊糖片球菌细菌素Z-1，其特征在于，将戊糖片球菌Z-1发酵，得到细菌素，采用pH 吸附法对细菌素进行粗提，通过纤维素DEAE-52离子交换层析柱和葡聚糖G-50分子筛对细菌 素进行分离纯化得到戊糖片球菌细菌素Z-1，经MALDI-TOF-MS分析确定戊糖片球菌细菌素的 分子量为8227.35Da。