[发明专利]一种戊糖片球菌Z-1、戊糖片球菌细菌素Z-1及戊糖片球菌细菌素Z-1的生产方法

权利要求书

1.一种戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）Z-1，其特征在于，一株戊糖片球菌Z-1的保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期为：2019年5月16日；保藏编号为CGMCC No.17820。

2.一种戊糖片球菌细菌素Z-1，其特征在于，将权利要求1所述的戊糖片球菌Z-1发酵，得到细菌素，采用pH吸附法对细菌素进行粗提，通过纤维素DEAE-52离子交换层析柱和葡聚糖G-50分子筛对细菌素进行分离纯化得到戊糖片球菌细菌素Z-1，经MALDI-TOF-MS 分析确定戊糖片球菌细菌素的分子量为 8227.35 Da，所述戊糖片球菌细菌素Z-1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示；

所述戊糖片球菌细菌素Z-1抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中的任一种或多种；

其中，革兰氏阳性菌包括植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum） 、清酒乳杆菌（Lactobacillus sake） 、弯曲乳杆菌（Lactobacillus campylobacter） 、肠膜明串珠菌（Leuconostocmesenteroides） 、腐生葡萄球菌（Staphylococcus saprophyticus） 、乳酸乳球菌（Lactococcuslactis） 、单核增生李斯特菌（Listeriamonocytogenes） 、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） ；

革兰氏阴性菌包括鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium） 、波茨坦沙门氏菌（Salmonella Potsdam） 、大肠杆菌（Escherichia coli） 。

3.根据权利要求2所述的一种戊糖片球菌细菌素Z-1的生产方法，其特征在于，包括下列步骤：

（1）将权利要求1所述的戊糖片球菌Z-1以1%（v/v）的接种量接种到无菌MRS液体培养基中，30℃恒温培养18-24h，然后在4℃条件下8000× g离心30 min，取其上清液用无菌0.22μm滤膜过滤，得到无细胞发酵上清液；

（2）无细胞发酵上清液在70℃条件下水浴30 min，凉至室温，调至pH值6.0，磁力搅拌使细菌素吸附于细胞表面，然后在4℃条件下8000× g离心30 min，收集菌体细胞，用50 mM磷酸钠缓冲液洗涤2次去除杂质，然后重新悬浮于100 mM NaCl溶液中，调pH=2.0，磁力搅拌解吸附，离心取上清，0.22 μm滤膜过滤，取滤液进行透析，经透析冻干之后得到细菌素粗提物；

（3）细菌素粗提物按设定比例溶于缓冲液中，经过DEAE-52纤维素柱洗脱和葡聚糖G-50层析柱之后，得到成分均一、稳定的戊糖片球菌细菌素Z-1。

4.根据权利要求3所述的一种戊糖片球菌细菌素Z-1的生产方法，步骤（3）中，所述的葡聚糖G-50层析柱的径高比为1:23；

所述的葡聚糖G-50层析柱的上样量为柱体积的5%；

所述的葡聚糖G-50层析柱平衡和洗脱的流速均为1 mL/min，收集方式为每3min收集一管，在OD₂₅₄ nm处测量吸光值。