[发明专利]一种肠激酶冻干制剂

说明书

本发明提供了一种肠激酶冻干制剂，包含肠激酶、稳定剂、填充剂、非离子表面活性剂和缓冲剂；所述的稳定剂由氨基酸中的一种或多种和糖类中的一种或多种组成；所述的氨基酸为α‑氨基酸及它们的可药用的盐形式；所述的糖类为非还原性多糖；所述的填充剂为甘露醇；所述的缓冲剂用于将制剂的pH维持在5.8~9.1的范围。本发明具有如下技术效果：1）本发明的肠激酶冻干制剂在冷藏环境下储存720天后纯度均在95%以上，活性保持率均在90%以上；此外，各冻干制剂形态未发生明显变化，其复溶后未见明显可见异物；2）本发明的肠激酶冻干制剂在室温环境下储存60天后纯度均在94%以上，活性保持率均在90%以上，各冻干制剂形态未发生明显变化，其复溶后未见明显可见异物。

技术领域

本发明涉及一种含有肠激酶的冻干制剂。

背景技术

肠激酶(Enterokinase，EC 3.4.21.9，EK)又称肠肽酶(Enteropeptidase)，是丝氨酸蛋白酶的胰凝乳蛋白酶家族的一部分，参与动物的消化过程。动物EK特异性的识别胰蛋白酶原的DDDDK序列，对其中赖氨酸羧基端的酰胺键进行酶切。

大肠杆菌融合蛋白表达系统现已广泛用于蛋白质的制备，但融合蛋白中的融合伴侣可能会影响目标蛋白的活性中心的形成，如果进入人体还可能令人体产生针对融合伴侣的抗体，影响药物效果并导致额外风险。因此必须用蛋白水解酶或化学裂解试剂切割融合蛋白，使融合伴侣与目标蛋白分开，并在后续纯化过程中除去融合伴侣。由于具有相对较高的特异性和较宽的活性范围，肠激酶及其衍生物是一种理想的用于处理融合蛋白的工具酶，在重组蛋白的生产中得到广泛使用，在蛋白药物研发中也起着重要作用。

目前，市场上的肠激酶产品大部分为液体制剂。而蛋白的液体制剂稳定性较差，其中的蛋白易于聚集、降解或失去活性，且液体制剂容易染菌，因此长期保存、销售和搬运时会导致产品质量降低。通过冷冻干燥法制备的冻干制剂可以克服这些不足。冷冻干燥法是一种在组合物冷冻后使水从组合物中升华的方法。通过去除组合物的水分减少甚至消除降解和聚集产物的形成，并破坏细菌的潜在生长环境，从而使组合物在干燥状态下延长贮存时间。冻干制剂通常包含填充剂、稳定剂和缓冲剂等，以保护活性成分在冻干期间和冻干后免受破坏。冻干制剂可通过加入水性溶剂，如注射用水，以简单的方式复溶，以提供用户可用的备用溶液。

本发明已经解决了上述技术问题，提供了一种含有肠激酶的制剂，该制剂外观物理缺陷少、复溶性佳、稳定性良好。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术存在的上述技术问题，提供能在2℃-8℃下长期储存期间稳定的肠激酶冻干制剂。

正是基于上述与现有技术完全不同的技术思路，发明人提供了一种新的技术解决方案，并解决了现有技术存在的技术问题。

本发明的技术方案如下：

一种肠激酶冻干制剂，包含肠激酶、稳定剂、填充剂、非离子表面活性剂和缓冲剂；

本发明中所使用的肠激酶，为本领域技术人员已知的任何肠激酶及其衍生物。肠激酶的添加量，即以注射用水复溶冻干制剂后，所得水溶液中肠激酶浓度为0.5～1mg/mL。

所述的稳定剂由氨基酸中的一种或多种和糖类中的一种或多种组成；

所述的氨基酸为α-氨基酸及它们的可药用的盐形式，优选精氨酸、甘氨酸及上述两者的盐酸盐中的一种或几种。特别优选精氨酸盐酸盐。其作用是在冻干过程中与肠激酶形成氢键，使肠激酶的天然构象得以保持；并与缓冲剂共同将体系pH值维持在一定范围内；此外，使用氨基酸的盐形式而不是氨基酸可以避免氨基酸在冻干过程中的结晶，进一步提高肠激酶稳定性。氨基酸的添加量，即以注射用水复溶冻干制剂后，所得水溶液中氨基酸浓度为0.05％～5％w/v，优选浓度为0.5％～3％w/v，最优选浓度为1％w/v。