[发明专利]梅毒螺旋体TP47重组抗原的制备及应用

说明书

本发明提供了一种用于检测苍白螺旋体(TP)抗体的重组TP47抗原，所述重组TP47抗原的制备方法，以及所述重组TP47抗原在制备用于检测苍白螺旋体(TP)的试剂盒中的应用。

技术领域

本发明属于生物医药领域，特别是属于传染病诊断和检测领域。

背景技术

梅毒是一种在全世界流行的传染病，据WHO估计，全球每年约有1200万新发病例，主要集中在南亚、东南亚和次撒哈拉非洲。近年来梅毒在我国增长迅速，已成为报告病例数最多的性病。

梅毒是由梅毒螺旋体，也称为苍白螺旋体(Treponema pallidum,TP)引起的慢性、系统性性传播疾病，在《中华人民共和国传染病防治法》中，梅毒被列为乙类防治管理的病种。其传播途径主要为性传播，临床上梅毒分为一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒、潜伏梅毒和先天梅毒(胎传梅毒)等。所报告的梅毒中，潜伏梅毒占多数，一、二期梅毒也较为常见，同时先天梅毒报告病例数也在增加。梅毒是人类独有的疾病，显性和隐性梅毒患者均是传染源。

由于人体被梅毒感染后的临床症状和体征无明显的特异性，所以，临床上主要依赖血清学实验结果来进行诊断。目前梅毒螺旋体的常用免疫学检测方法有非梅毒螺旋体抗原血清试验，如性病研究实验室试验(VDRL)、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)等，但该类方法以正常牛心肌心磷脂作为抗原,特异性不高，抗心磷脂抗体阳性的血清和高脂血症均会产生假阳性反应。另一类梅毒螺旋体免疫学检测方法是梅毒螺旋体抗原血清试验，如梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)等，该类方法采用的是Nichols株螺旋体作为抗原，但是，由于至今梅毒螺旋体不能在体外进行人工培养，抗原来源难度较高，试验操作繁琐，不易于推广。

近年来，随着对TP功能研究的深入和全基因组序列的公开，多种功能蛋白陆续被识别出来。另外，研究者们使用基因工程的方法对如TP15、TP17、TP47这些在TP菌株中具有特异性，并且抗原反应性较强的膜结合多肽蛋白进行重组表达，获得了具有抗原性的TP重组蛋白，这些重组蛋白应用于梅毒感染的诊断中，取得了良好的效果(ANNEGRET GERBER，SIEGFRIED KRELL，JOACHIM MORENZ；“Recombinant Treponema pallidum Antigens inSyphilis Serology”，Immunobiology，1996，196(5)：535-549)。目前，将TP特异性蛋白应用于梅毒感染诊断检测的较为常用的方法为化学发光磁微粒免疫法，原理是用TP特异性蛋白包被磁珠，配合化学发光仪器，检测血清中的TP抗体，从而进行梅毒感染的筛选判定。因而，具有良好的稳定性，同时兼具特异性和灵敏度的TP特异性蛋白是研究者们进行研究的目标，也是TP抗体测定试剂盒的品质保障。

TP47是TP整合性膜蛋白，具有很强的免疫原性，存在于梅毒患者的整个病程中，在梅毒螺旋体感染免疫中具有重要作用，TP47在梅毒抗体的检测中是一种重要的特异性蛋白。并且，在艾滋病病毒合并梅毒螺旋体感染的患者中，抗TP抗体含量低于一般梅毒患者也能使用TP47进行检测。但是野生型TP47蛋白并不能完美的使用在梅毒抗体的检测中，存在着稳定性不佳的缺陷(WO2013/107633A1)。为了保证TP抗体测定试剂盒的稳定性，迫切需要热稳定性优良的重组TP47抗原，同时所述重组蛋白还能保持特异性和灵敏度，并能应用于梅毒抗体的检测。

发明内容

本发明提供了一种用于检测苍白螺旋体(TP)抗体的重组TP47抗原，所述重组TP47抗原能够可溶性表达，热稳定性好，并且活性较高；本发明还提供了所述重组TP47抗原的制备方法；本发明还提供了所述重组TP47抗原在制备用于检测苍白螺旋体(TP)的试剂盒中的应用；以及所述重组TP47抗原在制备用于诊断梅毒的试剂盒中的应用。

第一方面本发明提供了用于检测苍白螺旋体(TP)的重组TP47抗原，所述重组TP47抗原具有选自如下的氨基酸序列：

(1)SEQ ID NOs：2-4任一项所示的氨基酸序列：