[发明专利]梅毒螺旋体TP47重组抗原的制备及应用

权利要求书

1.用于检测苍白螺旋体TP的重组TP47抗原，其特征在于所述重组TP47抗原为选自如下的氨基酸序列：SEQID NOs：2-4任一项所示的氨基酸序列。

2.分离的多核苷酸序列，其特征在于所述多核苷酸序列编码权利要求1的重组TP47抗原。

3.根据权利要求2所述的多核苷酸序列，其特征在于所述多核苷酸序列具有选自如下的多核苷酸序列：

（1）SEQ ID NOs：6-8任一项所示的多核苷酸序列；或

（2）与（1）限定的多核苷酸序列杂交且编码具有SEQID NOs：2-4任一项所示的氨基酸序列的多核苷酸序列。

4.含有权利要求2或3所述的多核苷酸序列的多核苷酸构建体。

5.宿主细胞，其特征在于所述宿主细胞是用权利要求2或3的多核苷酸序列或用权利要求4的多核苷酸构建体转染的，或包含权利要求2或3的多核苷酸序列或包含权利要求4的多核苷酸构建体，所述宿主细胞能产生权利要求1的重组TP47抗原。

6.制备权利要求1的重组TP47抗原的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

（1）在适合产生权利要求1的重组TP47抗原的条件下培养权利要求5的宿主细胞；以及

（2）任选地从步骤（1）获得的培养物分离重组TP47抗原。

7.根据权利要求6的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将权利要求2或3的多核苷酸序列转染权利要求5的宿主细胞，或将权利要求4的多核苷酸构建体转染权利要求5的宿主细胞；

（2）在适合产生权利要求1的重组TP47抗原的条件下培养步骤（1）的宿主细胞；以及

（3）任选地从步骤（2）获得的培养物分离重组TP47抗原。

8.根据权利要求7的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）利用如下引物，以野生型TP47的核苷酸序列为模板进行PCR扩增获得SEQIDNO：6所示的多核苷酸序列：

SEQIDNO：9所示的正向引物TP47-F；以及

SEQIDNO：10所示的反向引物TP47-R；

（2）将SEQIDNO：6所示的多核苷酸序列转化至大肠杆菌感受态细胞进行表达；以及

（3）从步骤（2）获得截短型TP47抗原DTP47。

9.根据权利要求8的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）利用如下引物，以包含SEQ ID NO：6的核苷酸序列为模板进行PCR扩增获得SEQ IDNO：7所示的多核苷酸序列：

SEQ ID NO：9所示的正向引物TP47-F，SEQ ID NO：12所示的反向引物C296S-R；以及

SEQ ID NO：11所示的正向引物C296S-F，SEQ ID NO：10所示的反向引物TP47-R；

（2）将SEQ ID NO：7所示的多核苷酸序列转化至大肠杆菌感受态细胞进行表达；以及

（3）从步骤（2）获得截短突变型TP47抗原C296S。

10.根据权利要求8的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）利用如下引物，以包含SEQ ID NO：6的核苷酸序列为模板进行PCR扩增获得SEQ IDNO：8所示的多核苷酸序列：

SEQ ID NO：9所示的正向引物TP47-F，SEQ ID NO：14所示的反向引物C296A-R；以及

SEQIDNO：13所示的正向引物C296A-F，SEQIDNO：10所示的反向引物TP47-R；

（2）将SEQ ID NO：8所示的多核苷酸序列转化至大肠杆菌感受态细胞进行表达；以及

（3）从步骤（2）获得截短突变型TP47抗原C296A。