[发明专利]一种枸杞多糖的掺杂鉴别及含量检测方法

权利要求书

1.一种枸杞多糖的掺杂鉴别方法，其特征在于：包括以下步骤，

A1、对枸杞进行多糖提取，包括脱脂、热水浸提、醇沉和干燥，得到枸杞多糖粗品，称重得到M1；

A2、将枸杞多糖粗品用超纯水溶解，并混匀、过滤，得到预检液；

A3、在预检液中加入复合糖化酶进行酶解，酶解后杀酶得到酶解液，将酶解液中加入无水乙醇，振摇后静置，离心，取沉淀加水溶解，过滤后得到多糖水溶解液；

A4、将多糖水溶解液进行水解及衍生反应，得到进样液；

A5、对进样液进行色谱分析，通过测量半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和氨基葡萄糖的峰面积百分比，进行掺杂鉴别；

A6、通过测量半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和氨基葡萄糖的峰面积百分比得到枸杞多糖总百分比，乘以M1和校正系数0.9后得到枸杞多糖的含量；

所述步骤A5中，进行掺杂鉴别的方法为：半乳糖、阿拉伯糖和氨基葡萄糖的峰面积相对百分比分别小于7％、14％和0.60％，且葡萄糖相对百分比大于63％，则初步判定掺杂有糊精或可溶性淀粉；

将枸杞经步骤A1和A2处理后，直接将预检液利用步骤A4的水解及衍生反应，再色谱分析，得到葡萄糖的峰面积百分比P2，若步骤A5中的葡萄糖百分比相较P2相对比例降低大于等于10％，则判定掺杂有糊精或可溶性淀粉；

所述步骤A1中枸杞多糖的提取包括以下步骤：

B1、脱脂：按质量份数，取100份枸杞粉碎，加入到300份的有机溶剂中脱脂、过滤，将过滤后滤渣干燥，用质量浓度80％的乙醇300份回流得到残渣，将残渣干燥；

B2、热水浸提：在步骤B1的残渣中加入90℃蒸馏水回流提取，收集得到枸杞的多糖提取液，将多糖提取液进行抽滤，滤液进行减压浓缩，得到多糖水浓提液；

B3、醇沉：将步骤B2中得到的多糖水浓提液置入无水乙醇中沉淀，抽滤后得到滤饼，将滤饼分别以质量浓度95％的乙醇、无水乙醇和丙酮进行洗涤，再真空干燥，得到枸杞多糖粗品。

2.根据权利要求1所述的一种枸杞多糖的掺杂鉴别方法，其特征在于：所述步骤B1中有机溶剂为石油醚或者氯仿与石油醚混合溶剂。

3.根据权利要求2所述的一种枸杞多糖的掺杂鉴别方法，其特征在于：所述步骤A4中的水解及衍生反应包括以下步骤，

C1、取100μL质量浓度为4-5g/L的多糖水溶解液于5mL的具塞刻度试管中，加入100μL的4mol/L的TFA，充N₂封管，于110℃烘箱中水解2h；

C2、冷却后加200mL甲醇，再用N₂吹干，重复加200mL甲醇并用N₂吹3次，去除TFA；

C3、加入50μL 0.3mol/L NaOH溶液充分溶解残渣，再加50μL、0.5mol/L的PMP甲醇溶液，漩涡混匀，在70℃的烘箱中反应100min；

C4、冷却后中和、萃取，并用微孔膜过滤，其滤液用微孔过滤膜过滤后，得到进样液。

4.根据权利要求3所述的一种枸杞多糖的掺杂鉴别方法，其特征在于：所述步骤C4中，所述中和步骤为：加50μL0.3 mol/L的HCL中和，所述萃取步骤为：加50μL0.3 mol/L的HCL中和，加水至1mL，再加等体积的氯仿，振摇，静置，弃去氯仿相；所述萃取次数为3次。

5.根据权利要求4所述的一种枸杞多糖的掺杂鉴别方法，其特征在于：所述步骤A5中色谱分析的色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18柱、流动相为0.1mol/L磷酸盐缓冲液和乙腈的混合液、柱温为30℃、检测波长为250nm、流速为1mL/min、进样体积为20μL。

6.根据权利要求5所述的一种枸杞多糖的掺杂鉴别方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液与乙腈混合液的体积比为磷酸盐缓冲液：乙腈＝83:17。