[发明专利]高效分泌异淀粉酶的基因工程菌有效
| 申请号： | 201911282988.4 | 申请日： | 2019-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN112980755B | 公开（公告）日： | 2023-05-12 |
| 发明（设计）人： | 游淳;石婷;刘珊 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;C12N15/56;C12N9/44;C12R1/125 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人： | 李蕊 |
| 地址： | 300308 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高效 分泌 淀粉酶 基因工程 | ||
1.一种高效分泌异淀粉酶的基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌以枯草芽孢杆菌为宿主，敲除α淀粉酶的编码基因并分泌表达异淀粉酶，其中来源于枯草芽孢杆菌的糖苷水解酶家族5葡聚糖内切酶(B .subtilis native glycoside hydrolase family 5endoglucanase，BsCel5)融合在异淀粉酶的N端，作为增强子促进异淀粉酶的分泌。
2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于：所述异淀粉酶为来源于硫化叶菌的天然异淀粉酶或其突变体，包含选自SEQ ID NO .2、SEQ ID NO .4、SEQ ID NO .6、SEQ IDNO .8和SEQ ID NO .10的氨基酸序列。
3.用于在权利要求1或2所述的基因工程菌中表达异淀粉酶的质粒，其特征在于：所述质粒包含启动子、核糖体结合位点、信号肽编码序列、BsCel5的编码基因、异淀粉酶编码基因和终止序列，其中信号肽编码序列、BsCel5的编码基因和异淀粉酶编码基因以所述顺序融合在一个开放读码框中，并且与启动子序列操作性连接。
4.用于构建权利要求1-3中任一项的基因工程菌的方法，其特征在于：包括：
(1)敲除枯草芽孢杆菌宿主中的α淀粉酶编码基因amyE；
(2)构建权利要求3的重组质粒，并将其转入步骤(1)中所获得的菌株中；
(3)根据载体上的标记基因筛选正确的转化子。
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