[发明专利]鉴别桔小实蝇幼虫是否经过辐照处理的试剂、方法及应用

说明书

本申请公开了一种鉴别桔小实蝇幼虫是否经过辐照处理的试剂、方法及应用。本申请鉴别桔小实蝇幼虫是否经过辐照处理的试剂为检测桔小实蝇幼虫体内Johah 44E基因和AKT基因的引物和/或探针。本申请鉴别桔小实蝇幼虫是否经过辐照处理的试剂，能够有效的检测桔小实蝇幼虫体内Johah 44E基因和AKT基因，通过分析Johah 44E基因相对于AKT基因的相对表达量，可以有效的判断桔小实蝇幼虫是否经过辐照处理。本申请的试剂和鉴别方法为桔小实蝇幼虫是否经过辐照处理鉴别提供了一种准确性高、重复性好、不受个体差异影响的新方法和途径。

技术领域

本申请涉及桔小实蝇幼虫检测领域，特别是涉及一种鉴别桔小实蝇幼虫是否经过辐照处理的试剂、方法及应用。

背景技术

随着国际贸易的不断深入和发展，外来有害生物的入侵频率和风险逐渐增大，这对生态环境、农业生产和粮食安全构成巨大的潜在威胁。如何有效的防控外来有害生物入侵，已经成为全世界关注的焦点和热点。

为保证有害生物不随国际贸易传播，根据国际惯例，在国际贸易中必须对可能携带有害生物的产品进行检疫处理。由于产品的特殊性，水果蔬菜、种苗花卉等鲜活植物产品携带有害生物的风险极高，是国际社会和各国检疫部门关注的焦点。

传统的水果蔬菜、种苗花卉等鲜活植物产品的检疫处理主要是熏蒸处理，即借助于熏蒸剂气体，主要是溴甲烷，在密闭空间内熏蒸杀灭有害生物。但是，由于溴甲烷对臭氧层有破坏作用；因此，根据《蒙特利尔议定书》，出于安全和环保考虑，熏蒸处理被逐步淘汰。为此，国际社会开发了辐照处理技术作为溴甲烷熏蒸的替代技术。

辐照处理是使用高能射线导致有害昆虫不育的处理技术。辐照处理可以使用钴源释放的伽马射线、高能X光或高能电子束作为能源，使用的剂量范围一般为100-300GY，具有清洁、快速等特点。目前，辐照处理在实蝇的检疫处理中的研究和应用最为成熟，国际植物保护公约组织(IPPC)颁布了多种实蝇辐照处理剂量的国际标准。

辐照处理通常以阻止害虫发育和繁殖作为控制目标，因此，与其它处理方法的最大区别就是处理后有害生物仍继续存活，常常能在口岸检疫查验过程中发现活虫。为了保证检疫处理的生物安全，需要确定害虫是否经过辐照处理，以及是否被处理了足够剂量；因此，亟需研发一种能够有效判断待测害虫是否有进行辐照处理的技术。

有研究显示，对于部分昆虫在辐照后会发生食道神经节缩小、体表变黑等形态学变化，可据此判断昆虫是否经过辐照处理。但这些组织形态学变化通常存在较大个体差异，很难实际应用。并且，目前对于桔小实蝇，尤其是桔小实蝇幼虫缺乏相关的研究。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的鉴别桔小实蝇幼虫是否经过辐照处理的试剂、方法及应用。

本申请采用了以下技术方案：

本申请的一方面公开了一种鉴别桔小实蝇幼虫是否经过辐照处理的试剂，该试剂为检测桔小实蝇幼虫体内Johah 44E基因和AKT基因的引物和/或探针。

需要说明的是，本申请经过研究发现桔小实蝇幼虫经过辐照处理后Johah44E基因的活性变化较大，且与辐照的剂量有相关性；而AKT基因在未辐照样品和辐照样品均有稳定的表达，几乎不受辐照剂量影响；因此，本申请提出选取Jonah 44E基因作为桔小实蝇幼虫辐照检测的目标基因，AKT作为内参基因，通过检测Jonah 44E基因相对于AKT基因的相对表达量，判断桔小实蝇幼虫是否经过辐照处理。因此，本申请的试剂，可以是检测Johah 44E基因和AKT基因的引物，或者探针，又或者引物和探针的组合；本申请的试剂能够有效的检测桔小实蝇幼虫体内的Johah 44E基因和AKT基因，由此可以计算出Johah 44E基因相对于AKT基因的相对表达量，从而判断出待测桔小实蝇幼虫是否有经过辐照处理。