[发明专利]一种基于CRISPR-Cas9的核酸检测系统及其应用有效
| 申请号： | 201911222549.4 | 申请日： | 2019-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN110777159B | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 徐峰;张超;张鹏晖 | 申请（专利权）人： | 苏州缔因安生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/113;C12N15/90;C12Q1/37 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 215129 江苏省苏州市苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 crispr cas9 核酸 检测 系统 及其 应用 | ||
1.一种基于CRISPR-Cas9的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述蛋白表达调控系统包括Cas9蛋白、RsgRNA和无细胞蛋白表达系统；
所述RsgRNA按5’-3’方向包括反义核酸和sgRNA；
所述RsgRNA中的反义核酸与sgRNA相互独立，靶核酸中的触发序列只与RsgRNA中的反义核酸杂交；
所述无细胞蛋白表达系统包括报告质粒和蛋白合成体系；
所述蛋白合成体系包括RNA聚合酶、核糖核苷酸、核糖体、氨酰tRNA、氨基酸、氨酰tRNA合成酶和ATP。
2.根据权利要求1所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述反义核酸的长度为10~20 bp。
3.根据权利要求1所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述反义核酸的核酸序列如SEQ ID NO: 1所示。
4.根据权利要求1所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述sgRNA的核酸序列如SEQID NO: 2所示。
5.根据权利要求1所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述RsgRNA的核酸序列如SEQ ID NO: 3所示。
6.根据权利要求1所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述报告质粒按5’-3’方向包括串联的元件：启动子、核糖体结合位点、蛋白表达框和终止子。
7.根据权利要求6所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述启动子包括T7启动子或T5启动子。
8.根据权利要求7所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述启动子为T7启动子。
9.根据权利要求6所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述蛋白包括蛋白酶。
10.根据权利要求9所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述蛋白酶为6-磷酸葡萄糖脱氢酶、乳糖脱氢酶、蔗糖转化酶或荧光素酶中的任意一种或至少两种的组合。
11.根据权利要求10所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶的核酸序列如SEQ ID NO: 4所示。
12.根据权利要求6所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述终止子包括为T7终止子。
13.根据权利要求1所述的蛋白表达调控系统，其特征在于，所述报告质粒的载体包括pFN6A/K、pFN18A/K、pIVEX、pIX、pET3a、pET32a、pET43a或pET15b中的任意一种。
14.一种核酸检测系统，其特征在于，所述核酸检测系统包括如权利要求1-13任一项所述的蛋白表达调控系统。
15.根据权利要求14所述的核酸检测系统，其特征在于，所述核酸检测系统还包括蛋白检测系统。
16.根据权利要求15所述的核酸检测系统，其特征在于，所述蛋白检测系统为蛋白酶检测系统。
17.根据权利要求16所述的核酸检测系统，其特征在于，所述蛋白酶检测系统包括酶底物和/或显色液。
18.根据权利要求16所述的核酸检测系统，其特征在于，所述蛋白酶包括6-磷酸葡萄糖脱氢酶、乳糖脱氢酶、蔗糖转化酶或荧光素酶中的任意一种或至少两种的组合。
19.根据权利要求17所述的核酸检测系统，其特征在于，所述酶底物包括葡萄糖-6-磷酸、乳糖、蔗糖或荧光素中的任意一种或至少两种的组合。
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