[发明专利]树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法

说明书

本发明涉及一种树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，该方法包括将炔基化合物与酯化底物进行酯化反应，得到含有酯基的炔基化合物；将含有酯基的炔基化合物加入多个端基为氨基的树杈状大分子中，以使酯基与其中一个氨基进行酰胺化反应，得到含有炔基的树杈状大分子；及将含有炔基的树杈状大分子与连接有一个叠氮基的核苷酸进行点击反应，得到树杈状大分子修饰的核苷酸。上述树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法得到的树杈状大分子修饰的核苷酸纯度更高。

技术领域

本发明涉及高分子合成技术领域，特别是涉及一种树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法。

背景技术

随着技术的不断发展，基因测序已经发展到第三代测序，即纳米孔测序。纳米孔测序的原理是：标记的核苷酸与纳米孔锚定的DNA聚合酶结合后，该标记的核苷酸与纳米孔相互作用而产生特征电信号，通过不同的标记的核苷酸所对应的特征电信号不同而得到待测核苷酸序列信息。

树杈状大分子(Dendrimer)是指不断地向外重复支化生长而得到的结构类似于树杈状的大分子，是一种新型的高分子化合物。树杈状大分子独特的球状结构及表面电荷，使其在溶液中的空间构象稳定。但是，目前制备得到的树杈状大分子修饰的核苷酸的纯度较低。

发明内容

基于此，有必要提供一种纯度高的树杈状大分子修饰的核苷酸制备方法。

一种树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，包括以下步骤：

将炔基化合物与酯化底物进行酯化反应，得到含有酯基的炔基化合物；

将所述含有酯基的炔基化合物加至多个端基为氨基的树杈状大分子中，以使所述酯基与其中一个所述氨基进行酰胺化反应，得到含有炔基的树杈状大分子；及

将所述含有炔基的树杈状大分子与连接有一个叠氮基的核苷酸进行点击反应，得到树杈状大分子修饰的核苷酸。

上述树杈状大分子修饰的核苷酸的制备方法，通过控制含有酯基的炔基化合物与所述多个端基为氨基的树杈状大分子的量，使得树杈状大分子的多个氨基端基中只有其中一个与含有酯基的炔基化合物发生酰胺化反应，从而使得一个多个端基为氨基的树杈状大分子上只连接一个炔基化合物，树杈状大分子得到单一修饰。然后单一修饰的树杈状大分子与核苷酸点击反应，从而得到的单一的树杈大分子修饰的核苷酸，提高树杈大分子修饰的核苷酸的纯度。

在其中一个实施例中，在所述将所述含有炔基的树杈状大分子与连接有一个叠氮基的核苷酸进行点击反应，得到树杈状大分子修饰的核苷酸的步骤之前，还包括将所述含有炔基的树杈状大分子进行纯化的步骤；及/或

所述点击化学反应为无金属催化的点击反应。

在其中一个实施例中，所述将所述含有酯基的炔基化合物加入多个端基为氨基的树杈状大分子中的步骤中，采用延时滴加的方式将所述含有酯基的炔基化合物加入所述多个端基为氨基的树杈状大分子中。

在其中一个实施例中，所述含有酯基的炔基化合物与所述多个端基为氨基的树杈状大分子的摩尔比不超过0.8：1。

在其中一个实施例中，所述多个端基为氨基的树杈状大分子为多个端基为氨基的树杈状大分子溶液，所述将所述含有酯基的炔基化合物加入多个端基为氨基的树杈状大分子中，以使所述酯基与其中一个所述氨基进行酰胺化反应，得到含有炔基的树杈状大分子的步骤包括：

将所述含有酯基的炔基化合物溶于溶剂，得到含有酯基的炔基化合物溶液，其中，所述含有酯基的炔基化合物的质量与所述溶剂的体积之比为50mg： 1mL～50mg：2mL；及

将所述含有酯基的炔基化合物溶液加入所述多个端基为氨基的树杈状大分子溶液中，并混合，以使所述酯基与其中一个所述氨基进行酰胺化反应，得到含有炔基的树杈状大分子。

在其中一个实施例中，所述炔基化合物具有一个炔基；及/或