[发明专利]一种能高效制备且应用安全的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种能高效制备且应用安全的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法与应用。本发明提供了一种慢病毒重组载体，其含有CAR结构编码序列和驱动所述CAR结构编码序列表达的启动子MND；所述启动子MND的核苷酸序列为序列1第2838‑3236位。本发明为了克服当前CAR T治疗过程中的转染效率低和产生细胞因子量大的缺点，通过改善启动子对CAR结构的启动，即用MND启动子启动CAR结构，制备出新的嵌合抗原受体，并制备表达该嵌合抗原受体的T细胞，该T细胞具有影响CAR分子在细胞表面表达较少的特性，与CD19阳性细胞结合时，有着使细胞杀伤作用较缓和的优点，如此可大大降低细胞因子风暴的发生，有效提高了安全性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种能高效制备且应用安全的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法与应用。

背景技术

CAR-T疗法就是嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，英文全称Chimeric AntigenReceptor T-Cell Immunotherapy。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。

尽管CAR-T在临床效果上取得了巨大的成功，其商业化推广上仍有不小的问题：其一，价格昂贵，诺华的KymriahTM上市定价高达47.5万美元，支付方式可以创新，生产制备成本却因无法规模化而居高不下。影响生产成本的因素有很多，其中转染率低是很重要的一个原因，并且在通用性CAR-T中依然会面临转染效率低的问题，提高转染效率可以有效促进临床级别细胞生产的工艺开发，显著降低制备成本；其二，一些施用CAR-T细胞疗法的患者会发生危险且有时常常是危及生命的副作用，该副作用称为细胞因子释放综合征(CRS)或细胞因子风暴，其中输注的活化T细胞产生的细胞因子快速且大量释放到血流中的全身炎症反应，从而导致危险的低血压，高烧和寒战。在严重的CRS情况下，患者会发生生命危险。

针对CAR-T转染效率低制备成本高问题，目前常规解决办法是为采用合适的转染试剂、保持最佳的细胞状态或选择最佳的转染方法；但是这些改变转染效率还是低，制备成本还是高。

关于施用CAR-T细胞疗法的患者的细胞因子风暴副作用产生，目前研究发现，CAR-T细胞上CAR分子的数量会严重影响到对靶细胞的结合效率与活化效率；如果CAR分子表达效率低，可能导致CAR-T细胞不能有效活化，从而影响治疗效果；但是细胞表面的CAR分子密度过高，在治疗过程中反应强度激烈，会导致大量的细胞因子产生，提高细胞因子风暴(CRS)发生的风险。

因此，寻求一种可以高效低成本制备且在治疗同时可以降低细胞因子风暴的抗原受体T细胞是目前急需要解决的难题。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种慢病毒重组载体。

本发明提供的慢病毒重组载体，其含有CAR结构编码序列和驱动所述CAR结构编码序列表达的启动子MND；

所述启动子MND的核苷酸序列为序列1第2838-3236位；

所述CAR结构依次包括胞外结合结构域、一个或多个铰链结构域或间隔结构域、跨膜结构域、一个或多个胞内共刺激信号转导结构域以及初级信号转导结构域。