[发明专利]一种检测副溶血性弧菌TD毒素的胶体金塑封检测卡及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种检测副溶血性弧菌TD毒素的胶体金塑封检测卡及其制备方法和应用，所述的检测卡由按顺序依次固定的样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫组成，其中胶体金垫内有胶体金标记抗副溶血性弧菌TD毒素抗原的单表位抗体；硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线；对上述检测核心进行冷裱塑封，并在加样处留出加样孔。通过本发明的实施，开发出低成本易制作的副溶血性弧菌TD毒素快速免疫检测卡的生产制备技术及其产品，推进本领域的技术进步。

技术领域

本发明涉及一种检测副溶血性弧菌TD毒素的胶体金检测卡及其制备方法和应用，本发明应用了抗体制备技术和胶体金检测方法。

背景技术

根据WHO估计，发达国家食源性疾病的漏报率在90%以上，而发展中国家则为95%以上。以此推论，我国目前掌握的食物中毒数据仅为我国实际发生的食源性疾病的“冰山一角”。 而如此高的漏报率，除管理上的问题外，致病微生物的检测和溯源手段的限制也是一个重要因素。当前细菌性食物中毒主要有感染型中毒和毒素型中毒两种。副溶血性弧菌TD毒素是一种近期较为常见的食源性致病原，在发生规模及人群暴露规模呈明显上升趋势，已经高居微生物性食物中毒首位，可能是由于人们饮食中海产品的比重上升，而海产品中普遍携带副溶血性弧菌，更由于冷藏条件不完善，导致海产品中副溶血性弧菌增殖及产生毒素，误食后即导致呕吐腹泻等食物中毒症状。

目前我国食品安全研究队伍、设备和经费都十分缺乏，与国外相比，仍具有较大差距，主要表现在检测项目少、质量不稳定，不能满足食品检测工作的要求。严峻的现实向微生物检测提出了更高的要求―更准确、更快速地检出与监测病原菌。

传统上我国食源性疾病的病原检测、鉴定手段仍停留在传统的病原菌培养，此检验法的最大弱点是慢，难以适应诊断与治疗，主要包括两种方法：一是PCR分子鉴定技术检测病原菌，虽然灵敏度高、快速，可直接检测，但对实验室和试剂的要求比较高，否则结果十分不可靠；二是酶联免疫法（ELISA）检测虽是一项比较成熟的免疫分析技术，但该法操作比较繁琐，检测时间长，并需在实验室进行，不能满足现场快速检测的需求。因此，目前病原微生物检测方法的落后性在相当大的程度上限制了对引起食源性疾病的病原菌的溯源及鉴定能力。而当发生食物中毒事件时，由于中毒潜伏期短，来势急剧，短时间内可能有多数人发病，发病曲线呈突然上升的趋势，只有在最短时间内掌握食物中毒发生情况，确定中毒原因，才能控制食物中毒的蔓延和事态的扩大，保障人民身体健康。因此，开发应用于现场的快速、灵敏的食品安全检测技术平台是今后食品安全检测的趋势。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明提供一种检测副溶血性弧菌TD毒素的胶体金检测卡及其制备方法和应用，采用单表位的副溶血性弧菌TD毒素抗原制备出针对单表位抗体，该抗体作为胶体金检测卡的胶体金垫的组分，具有良好的特异性和灵敏度。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种检测副溶血性弧菌TD毒素的胶体金塑封检测卡，所述检测卡包括试纸条，所述试纸条包括背板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫在背板上按顺序依次固定，所述胶体金垫内含有胶体金标记抗副溶血性弧菌TD毒素抗原的单表位抗体；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线；所述检测卡上设置有样本孔，所述样本孔位于样品垫正上方，所述试纸条上还设置有盖膜。

进一步的，所述检测线和质控线平行排列；所述胶体金垫中，胶体金的粒径为10nm；所述硝酸纤维素膜的孔径为6um；所述抗副溶血性弧菌TD毒素抗原的单表位抗体的用量为20ug，检测线包被单表位抗体的用量为25ug；所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫之间设有1-2mm的重叠区；所述样品垫、胶体金垫均为玻璃纤维，吸水垫为纤维素纤维；所述背板为PVC板；所述试纸条尺寸为60mm×3.7mm。

本发明还提供一种检测副溶血性弧菌TD毒素的胶体金塑封检测卡制备方法，包括以下步骤：

副溶血性弧菌培养液裂解及除盐，得到副溶血性弧菌裂解液；