[发明专利]一种检测多巴胺的高灵敏荧光探针的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种检测多巴胺的高灵敏荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将带有Aⁿ长度的适体加入TCEP的醋酸缓冲液中，然后与AuNPs溶液混合反应，孵育18h以上，得溶液Ⅰ；所述步骤（1）中适体序列为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6或SEQ ID No.7中的任一项，适体5'端修饰有-SH；

（2）向经步骤（1）处理的溶液Ⅰ中加入1×PBS调整溶液的pH值和离子强度，再孵育6-8h，得溶液Ⅱ；

（3）向经步骤（2）处理的溶液Ⅱ中分两次加入NaCl溶液，每次间隔2-3h，然后再分三次加入NaCl溶液，每次间隔3-4h，静置40-50h，得溶液Ⅲ；

（4）将溶液Ⅲ离心三次，每次离心混合物用PBS溶液清洗两次，然后将沉淀重新分散在PBS溶液中，加入FAM-DNA，于37℃条件下振荡反应2-3h，得高灵敏荧光探针；所述步骤（4）中FAM-DNA序列为SEQ ID No.8所示，其3'端修饰有FAM荧光基团。

2.根据权利要求1所述的检测多巴胺的高灵敏荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中适体在的TCEP的醋酸缓冲液中的浓度为5-10 μM、适体的TCEP的醋酸缓冲液体积为10-50μL；AuNPs溶液的浓度为0.1-0.5μM、体积为100-300μL，TCEP的醋酸缓冲液的浓度为10 mM。

3.根据权利要求1所述的检测多巴胺的高灵敏荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中1×PBS调整溶液的体积为25-30 μL，pH值为3.5-8.4。

4.根据权利要求1所述的检测多巴胺的高灵敏荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中NaCl溶液的浓度为2M，前两次每次加入NaCl溶液的体积15-20μL；后三次每次加入NaCl溶液的体积35-40μL。

5.利用权利要求1-4任一项所述的方法制备的高灵敏荧光探针非疾病诊断和检测为目的的检测多巴胺的方法，其特征在于，步骤如下：将待测样品溶液加入到高灵敏荧光探针溶液中，于室温黑暗条件下培养0.5-1.5h，得反应液，向反应液中加入10μg/mL、80μL的氧化石墨烯，等待20-30min后进行荧光检测。