[发明专利]一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂

说明书

本发明提供了一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，所述检测试剂包括包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球、辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原和化学发光底物。本发明所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂通过双抗原夹心法，首先利用磁性微球作为固相载体来固定丙型肝炎病毒抗原，再结合辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原，实现了双抗原夹心丙型肝炎病毒抗体，再经化学发光底物显色，三者相互配合，共同实现了丙型肝炎病毒抗体的检测。本发明所述检测试剂特异性强、灵敏度高，可以实现快速检验丙型肝炎病毒抗体的目的。

技术领域

本发明属于检测试剂技术领域，涉及一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂。

背景技术

丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的病毒性肝炎，主要经输血、针刺、吸毒等途径传播，是一种隐匿性、传染性、持续性、进展性疾病。丙型肝炎慢性化率可高达50-80％，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌(HCC)。HCV属于黄病毒科(flaviviridae)，其基因组为单股正链RNA，易变异，目前可分为6个基因型及不同亚型，按照国际通行的方法，以阿拉伯数字表示HCV基因型，以小写的英文字母表示基因亚型(如1a、2b、3c等)。中国的主要流行型是基因1b型和2a型。

HCV感染常用的实验室检测包括血清生化学检测、抗-HCV检测、HCV RNA检测及基因型芯片检测等。国内少有基于实时荧光定量PCR技术定量检测HCV基因型的试剂盒应用于临床检测中，这些试剂盒所提供的HCV-RNA提取方法主要是酚-氯仿法和柱提取法。该类试剂盒存在很多不足之处：1)检测灵敏度低，约在10000IU/mL左右；检测范围窄，一般在1.00E+04～1.00E+07IU/mL之间，对于临床高值(大于5.00E+07IU/mL)和低值(小于1.00E+04IU/mL)的样本无法检测；2)对于HCV基因型覆盖不全，只能检测其中某种基因型下的亚型；3)酚-氯仿法是最经典的RNA提取方法，但是操作繁琐，对于设备和人员操作要求高，低病毒载量的标本检出率低，且所用试剂具有一定的毒性；柱提取方法无需高速离心，但是需频繁更换离心管，用时长，特异性较差；4)无法有效去除样本中的PCR抑制物(如：血脂、强溶血等)；5)国外试剂成本和耗材成本太高，很难在临床广泛开展。CN103725797A公开了一种丙型肝炎病毒基因型检测试剂盒，其包括6种基因型的丙型肝炎病毒PCR反应液，所述6种基因型的丙型肝炎病毒PCR反应液中均含有用于靶多核苷酸检测的探针和用于靶多核苷酸扩增的上下游引物，该试剂盒用磁珠法提取样本核酸，采用实时荧光定量PCR技术，以HCV基因组的高度保守区域为扩增靶目标，但是其检测灵敏度仍然较低，并且检测时间较长。

现在常有的HCV检测技术有两种方式：(1)间接检测，主要检测抗HCV抗体和抗原；(2)直接检测，通过定性或定量检测HCV病毒粒子的组成成分确定病毒的存在，例如HCVRNA。这两种检测方式在确诊HCV感染，选择HCV感染者的治疗方案以及评价抗HCV治疗的疗效方面起到了关键作用。目前，双抗原夹心法成功用于检测抗HIV和Tp抗体，此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。而丙型肝炎病毒抗体的检测仍采用间接ELISA技术，主要由于过氧化物酶直接标记丙型肝炎病毒抗原，其灵敏度达不到要求，尤其是标记丙型肝炎病毒核心抗原后使抗原活性降低，因此灵敏度较差。

因此，目前需要开发一种检验灵敏度高，且可实现快速检验的丙型肝炎病毒抗体的检测试剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种丙型肝炎病毒抗体的检测试剂，所述检测试剂包括包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球、辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原和化学发光底物。本发明所述丙型肝炎病毒抗体的检测试剂利用双抗原夹心法，特异性地选择了包被丙型肝炎病毒抗原的磁性微球与辣根过氧化物酶标记的丙型肝炎病毒抗原，同时再结合化学发光底物显色，使所述检测试剂具备了特异性强、灵敏度高、快速检验丙型肝炎病毒抗体的功能。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：