[发明专利]一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法及其制得的压片

说明书

本发明提供了一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法及其制得的压片，方法包括以下步骤：将健康的草莓植株根部清洁后，保湿放置；将新长的根尖剪下，清洗备用；去除根尖断面，放入8‑羟基喹啉中，避光处理；用KCl浸泡根尖；用固定液冷藏固定根尖；清洗固定后的根尖，将其放入HCl中水浴解离；清洗解离后的根尖，对其滴加70％冰醋酸；将根尖置于载玻片上，制片，以待镜检。本发明通过确定每一步的处理时间、处理温度以及操作方法，获得了一种成熟、稳定、分裂相多、均匀、清晰、可重复性高染色体压片技术，为开展种鉴定、倍性鉴定和种间亲缘关系确定提供必要的技术支持。

技术领域

本发明涉及草莓根尖染色体压片方法，特别涉及一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法及其制得的压片。

背景技术

草莓属于蔷薇科(Rosaceae)蔷薇亚科(Rosoideae)草莓属(Fragaria)多年生草本植物。其近缘种植物包括蛇莓属(Duchesnea)和委陵菜属(Potentilla),它们的染色体基数均为x＝7。草莓属倍性丰富，自然界中分布有二倍体(2n＝2x＝14)、四倍体(2n＝4x＝28)、六倍体(2n＝6x＝42)、八倍体(2n＝8x＝56)等不同的倍性。草莓属种质资源丰富，已知全世界约有24个野生种，我国有11个草莓野生种的自然分布，野生草莓资源不仅对不良环境具有较好的生态适应性，还蕴藏着丰富的抗性基因，野生草莓资源是草莓新品种改良的潜力所在，是栽培种改良非常重要的遗传资源。

目前，资源圃资源的分类鉴定是一项常规性工作，倍性鉴定在植物遗传育种上具有重要的作用，准确鉴定资源的倍性水平对于品种的鉴定、杂交组合的选配、杂交后代材料的前筛选、亲缘关系的鉴定等均具有十分重要的意义。染色体是遗传物质在肉眼可见层面的载体和物质基础，通过对草莓的染色体的研究，为植物品种分类、鉴定提供可靠的依据，为探索植物遗传多样性、丰富植物基因库奠定基础。

染色体计数法是目前确定植物染色体倍性最直接、最准确的方法，通过观察草莓染色体，可以从细胞学水平上对其起源进化问题进行研究，也可以在染色体水平上为草莓品种的起源演化以及分类研究提供重要的细胞学依据。与其他物种如菊花、枣、葡萄等相比，草莓是小型染色体植物，在制片过程中存在许多难点，取材时间、预处理药剂、时间长短、温度和解离时间等因素都会影响染色体的制片效果，而目前在预处理药剂，处理时间，温度方面并没有统一的标准。国外曾有人做草莓染色体的观察，但是稳定性差、可重复性低、分裂相少，目前国内研究报道也比较少，因此，一种成熟、稳定、高质量的草莓根尖染色体技术的开发，对开展草莓资源倍性鉴定、种间鉴定和种间亲缘关系确定具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法，通过培养根尖、确定关键步骤的处理时间、处理温度，得到一个快速、稳定的草莓染色体根尖压片技术，对于草莓倍性鉴定、品种鉴定、杂交组合选配、杂交后代材料前筛选、亲缘关系鉴定等均具有十分重要的意义，同时为探索植物遗传多样性，丰富植物基因库奠定基础。

技术方案：

本发明快速获得草莓根尖染色体的压片方法，包括以下步骤：

步骤1：材料预处理

将健康的草莓植株根部清洁后，保湿放置30-50小时；

步骤2：取材

将新长出的根尖在0.8-1.2cm处剪下，并将剪下的根尖清洗后备用；

步骤3：浓缩、低渗

去除根尖断切面后，将其放入0.002M的8-羟基喹啉中，室温下避光处理2-4h后，处理后用0.075M的KCl将根尖浸泡20-40min；

步骤4：固定解离

用固定液将根尖冷藏固定24h以上，清洗后将其放入1M的HCl中，水浴10-20min以进行解离；