[发明专利]一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法及其制得的压片在审
| 申请号: | 201911188479.5 | 申请日: | 2019-11-28 |
| 公开(公告)号: | CN110849686A | 公开(公告)日: | 2020-02-28 |
| 发明(设计)人: | 庞夫花;赵密珍;周宇韬;王珑静;陈晓东;蔡伟建;王静 | 申请(专利权)人: | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号: | G01N1/28 | 分类号: | G01N1/28 |
| 代理公司: | 江苏斐多律师事务所 32332 | 代理人: | 王长征 |
| 地址: | 210000 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 快速 获得 草莓 根尖 染色体 压片 方法 及其 | ||
1.一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1:材料预处理
将健康的草莓植株根部清洁后,保湿放置30-50h;
步骤2:取材
将新长出的根尖在0.8-1.2cm处剪下,并将剪下的根尖清洗后备用;
步骤3:浓缩、低渗
去除根尖断切面后,将其放入0.002M的8-羟基喹啉中,室温下避光处理2-4h后,处理后用0.075M的KCl浸泡根尖20-40min;
步骤4:固定、解离
用固定液将根尖冷藏固定24h以上,然后清洗去除固定液后,再将根尖放入1M的HCl中,水浴10-20min进行解离;
步骤5:制片预处理
将解离后的根尖清洗后,向其滴加70%冰醋酸,放置3-5min;
步骤6:制片
将根尖置于载玻片上,滴加70%的冰醋酸后,盖上盖玻片,当细胞分散均匀后,再在载玻片上滴加固定液,然后将压片加热固定,以待镜检。
2.根据权利要求1所述的一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法,其特征在于:步骤1中用潮湿的报纸或者纸巾将根部包裹以保湿,置于25℃放置48h。
3.根据权利要求1所述的一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法,其特征在于:步骤2具体操作过程为,在上午9:00-10:00之间,选取新长出的粗根尖,在离根尖1cm处剪下,并将剪下的根尖用去离子水清洗后备用。
4.根据权利要求1所述的一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法,其特征在于:步骤3具体操作过程为,将根尖断面处去掉,放入0.002M的8-羟基喹啉中,室温下避光处理2-4h后,再用0.075M的KCl将根尖浸泡30min。
5.根据权利要求1所述的一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法,其特征在于:步骤4具体操作过程为,用固定液将根尖于4℃下冷藏24h以上,冷藏后用去离子水清洗去除根尖上残留的固定液,再将根尖放入1M的HCl中,60℃水浴处理10-20min。
6.根据权利要求1所述的一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法,其特征在于:步骤5具体操作过程为,将解离后的根尖用去离子水清洗,再将根尖转移至载玻片上,吸去水分后,对其滴加70%冰醋酸,放置3-5min,至分生组织区域呈现白色。
7.根据权利要求1所述的一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法,其特征在于:步骤6具体操作过程为,将根尖转移至新载玻片上,滴加70%的冰醋酸,盖上盖玻片,垫上盖玻片下面一角,轻敲盖玻片使细胞分散均匀,在载玻片上滴加固定液,然后将压片加热固定,以待镜检。
8.根据权利要求1所述的一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法,其特征在于:所述固定液为乙醇:冰醋酸的体积比为3:1的混合液。
9.根据权利要求7所述的一种快速获得草莓根尖染色体的压片方法,其特征在于:对盖玻片数次施加0.01-0.02N/cm2的压强,使细胞分散均匀。
10.一种草莓根尖染色体的压片,其特征在于:由上述任意权利要求所述的方法制得。
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