[发明专利]检测厌氧氨氧化菌的方法

说明书

本发明属于污水检测技术领域，涉及一种检测厌氧氨氧化菌的方法。该方法包括以下步骤：ⅰ)构建含有厌氧氨氧化菌的DNA片段的质粒；ⅱ)将质粒导入感受态细胞中，并且对感受态细胞进行扩繁，提取扩繁后的感受态细胞中的质粒，对该质粒进行梯度稀释，获得不同浓度的质粒；ⅲ)从污染物中提取厌氧氨氧化菌，提取该厌氧氨氧化菌的DNA；ⅳ)同时对不同浓度的质粒和步骤ⅲ)获得的DNA进行荧光定量PCR，获得各自对应的荧光强度；ⅴ)根据不同浓度的质粒以及每个浓度的质粒对应的荧光强度，绘制标准曲线；ⅵ)根据标准曲线和步骤ⅴ)获得的DNA对应的荧光强度，计算污染物中厌氧氨氧化菌的含量。该方法能够准确检测污染物中厌氧氨氧化菌的含量。

技术领域

本发明属于污水检测技术领域，更具体地，涉及一种检测厌氧氨氧化菌的方法。

背景技术

厌氧氨氧化指在生物反应过程中，在细胞质内，氨和NH₂OH被某种膜包裹的联胺水解酶氧化成N₂H₄，联胺氧化酶把N₂H₄最终氧化成N₂。厌氧氨氧化工艺具有以下特点：在反应的过程中不需要额外添加有机碳源作为电子供体，不仅节约了成本，而且还防止了由于投加碳源而产生的二次污染；反应过程中只需要将进水中大约50％的氨氮氧化成亚硝态氮，从而节省了供氧的动力消耗；并且在反应过程中几乎不产生NO₂，从而避免了在传统的硝化-反硝化工艺中有害气体的排放；微生物增值速度慢，产泥量少。基于以上特点，厌氧氨氧化过程在污水治理上受到了广泛关注。

参与厌氧氨氧化过程的微生物主要是厌氧氨氧化菌(anaerobic ammoniumoxidation，Anammox)菌，属于浮霉菌门，“红菌”是本领域对厌氧氨氧化菌的俗称，通过生物化学反应，它们可以将污水中所含有的氨氮转化为氮气去除。它们对全球氮循环具有重要意义，也是污水处理中重要的细菌。

因此，准确检测厌氧氨氧化菌的含量，对于厌氧氨氧化菌对于污水治理具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测厌氧氨氧化菌的方法，准确检测污染物中厌氧氨氧化菌的含量。

为了实现上述目的，本发明提供一种检测厌氧氨氧化菌的方法，该方法包括以下步骤：

ⅰ)构建含有厌氧氨氧化菌的DNA片段的质粒；

ⅱ)将所述质粒导入感受态细胞中，并且对所述感受态细胞进行扩繁，提取扩繁后的感受态细胞中的质粒，对该质粒进行梯度稀释，获得不同浓度的质粒；

ⅲ)从污染物中提取厌氧氨氧化菌，提取该厌氧氨氧化菌的DNA；

ⅳ)同时对步骤ⅱ)获得的不同浓度的质粒和步骤ⅲ)获得的DNA进行荧光定量PCR，获得步骤ⅱ)获得的不同浓度的质粒分别对应的荧光强度和步骤ⅲ)获得的DNA对应的荧光强度；

ⅴ)根据步骤ⅳ)获得的不同浓度的质粒以及每个浓度的质粒对应的荧光强度，绘制标准曲线；

ⅵ)根据所述标准曲线和步骤ⅴ)获得的DNA对应的荧光强度，计算所述污染物中厌氧氨氧化菌的含量。

具体地，步骤ⅰ)包括以下步骤：

a)获取厌氧氨氧化菌；

b)提取所述厌氧氨氧化菌的DNA，之后进行PCR，获得厌氧氨氧化菌的DNA片段，即PCR产物；

c)将所述DNA片段导入载体中，构建含有厌氧氨氧化菌的DNA片段的质粒。

不难理解地，厌氧氨氧化菌可以从待检测的污染物中获得。