[发明专利]一种具有抗炎作用的念珠藤提取物的制备方法

说明书

本发明提供一种具有抗炎作用的念珠藤提取物的制备方法，包括以下步骤：首先取8公斤念珠藤根和茎干燥后粉碎，用乙醇浸泡2小时，超声回流提取3次，合并提取液，过滤，旋转蒸发仪减压浓缩得浸膏，浸膏以适量硅藻土拌匀，用滤纸筒严密包好后放入索氏提取器抽提筒内，在干燥的索氏提取器抽提筒加入乙酸乙酯，安装好索氏提取器，在恒温电热套中抽提6小时，提取液旋转蒸发浓缩得浸膏，浸膏采用硅胶柱层析，洗脱液旋转蒸发回收溶剂后冷冻喷雾干燥，得提取物干燥粉，本发明通过念珠藤有效部位提取观察抗炎作用的实验研究可准确全方位的分析了念珠藤提取物对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响。

技术领域

本发明是一种具有抗炎作用的念珠藤提取物的制备方法，属于中药材技术领域。

背景技术

念珠藤为夹竹桃科念珠藤属植物念珠藤的干燥地上部分，为传统民间草药，在福建、浙江、广东等地民间被广泛使用。味苦,性辛温,有小毒。具祛风利湿、活血通络等功效。用于治疗风湿性关节痛，泄泻，脚气，周身浮肿，经闭，跌打损伤等症，念珠藤提取物物在不同的浓度对RAW 264.7细胞24小时的毒性不清楚，现在急需一种具有抗炎作用的念珠藤提取物的制备方法来解决上述出现的问题。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明目的是提供一种具有抗炎作用的念珠藤提取物的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种念珠藤提取物的制备方法，首先取8公斤念珠藤根和茎干燥后粉碎，用6倍量70％乙醇浸泡2小时，超声回流提取3次，时间分别为30min、20min、20min，合并提取液，过滤，旋转蒸发仪减压浓缩得浸膏，浸膏以适量硅藻土拌匀，用滤纸筒严密包好后放入索氏提取器抽提筒内，在干燥的索氏提取器抽提筒加入20倍量乙酸乙酯，安装好索氏提取器，在恒温电热套中抽提6小时，提取液旋转蒸发浓缩得浸膏，浸膏采用硅胶柱层析，三氯甲烷－甲醇按体积比6:4进行洗脱，洗脱液旋转蒸发回收溶剂后冷冻喷雾干燥，得提取物干燥粉。

进一步地，一种念珠藤提取物的念珠藤有效部位提取及抗炎作用的实验研究，包括以下步骤：配制成所需浓度的混悬液、毛细血管通透性实验、角叉菜胶致大鼠胸膜炎实验、念珠藤提取物对RAW 264.7细胞的毒性作用分析、酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎症因子检测IL-6和TNF-α；

(1)配制成所需浓度的混悬液：动物实验临用前用1％CMC溶液研磨、配制成所需浓度的混悬液。细胞实验临用前用0.1％DMSO溶液溶解后使用；

(2)毛细血管通透性实验：取小鼠40只，随机分为四组：模型对照组，吲哚美辛组，念珠藤提取物高剂量组，低剂量组，每组10只，雌雄各半，按表1剂量灌胃给药，模型对照组给予等容积1％CMC溶液，1次/d，连续给药5d，末次给药30min后给予小鼠尾静脉注射0.6％伊文思蓝溶液10mL·kg^-1，随即腹腔注射0.6％冰醋酸10mL·kg^-1，30min后脱臼处死，打开腹腔，用5mL生理盐水洗涤腹腔，吸出洗涤液，合并，3000r·min^-1离心15min，取上清液于595nm波长处测定吸收度A值；

(3)角叉菜胶致大鼠胸膜炎实验：取大鼠32只，随机分为5组，每组8只，给药方法同(2)，于第5d给药30min后，乙醚麻醉大鼠，正常对照组向右胸腔注入无菌生理盐水0.2ml，其余各组注入1％角叉菜胶无菌溶液0.2ml。致炎4h后水合氯醛麻醉处死大鼠，剪开腹部皮肤，暴露膈肌，于胸腔内注入2ml生理盐水胸腔洗液(胸腔洗液中含5U/ml肝素钠，10μg/ml吲哚美辛)，轻柔震荡，令胸腔内液体均匀混合，取0.1ml作白细胞计数，其余胸腔渗出液3000r/min离心15min，取上清液用Elisa方法测定肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6含量；