[发明专利]一种同时载有siRNA和顺铂前药的新型酸敏纳米载体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种细胞内涵体pH响应的高分子材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、溴代聚乙二醇的合成：

将聚乙二醇和三乙胺溶于二氯甲烷中，在冰盐浴中，滴加α-溴异丁酰溴，在室温下搅拌反应20～30小时后，分别用氢氧化钠和盐酸水溶液洗涤反应液，最后用去离子洗涤，收集有机相，用无水硫酸镁干燥后，浓缩溶液，加入冷乙醚沉淀出产物，真空干燥后收集白色粉末状产物；其中，聚乙二醇、三乙胺、α-溴异丁酰溴的用量分别为1.5～1.8mmol、8～10mmol、8～10mmol，氢氧化钠和盐酸水溶液的浓度均为0.8～1.2mol/L；

S2、聚乙二醇-b-聚(2-(二异丙基氨基)乙基甲基丙烯酸酯的合成：

将10～15mmol 2-(二异丙基氨基)乙基甲基丙烯酸酯、0.12～0.18mmol溴代聚乙二醇和0.12～0.18mmol N,N,N',N',N'-五甲基二亚乙基三胺加入到聚合管中，然后加入2～5mL二甲基甲酰胺和2～5mL 2-异丙醇溶解单体和溴代聚乙二醇，冷冻-解冻除去氧气，在氮气氛下加入0.12～0.18mmol CuBr，并将聚合管真空密封，在38～42℃聚合20～30小时后，加入四氢呋喃稀释产物，然后使用中性三氧化二铝柱除去催化剂CuBr，收集滤液，将滤液转移至透析管中，截留分子量为5000～8000的产物，用去离子水透析，最后真空冷冻干燥产品。

2.根据权利要求1所述的细胞内涵体pH响应的高分子材料的制备方法，其特征在于，步骤S1中加入冷乙醚沉淀出产物这一过程是反复沉淀了3次。

3.根据权利要求1所述的细胞内涵体pH响应的高分子材料的制备方法，其特征在于，步骤S2中除去氧气的过程是冷冻-解冻三次除去氧气。

4.根据权利要求1所述的细胞内涵体pH响应的高分子材料的制备方法，其特征在于，步骤S2中用去离子水透析为用去离子水继续透析3天。

5.由权利要求1-4任一权利要求所述的制备方法制备得到的细胞内涵体pH响应的高分子材料聚乙二醇-b-聚(2-(二异丙基氨基)乙基甲基丙烯酸酯。

6.一种同时载有siRNA和顺铂前药的新型酸敏纳米载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)化疗前体药物顺铂前药的制备：

取一定量的二氯二胺顺铂溶于二甲基甲酰胺中，随后向该溶液中加入辛酸酐，在58℃～62℃条件下搅拌反应15～20小时后，滤去沉淀，浓缩滤液，然后加入冷的乙醚沉淀出产品，用乙醚洗涤，最后真空干燥，收集黄色产品化疗前体药物顺铂前药；其中，二氯二胺顺铂、二甲基甲酰胺、辛酸酐的用量分别为0.3～0.5mmol、8～12mL、1.2～1.3mmol。

(2)新型酸敏纳米药物的制备：

选取DMF作为溶剂，配置浓度为18～22mg/ml的聚乙二醇-b-聚(2-(二异丙基氨基)乙基甲基丙烯酸酯溶液和4～6mg/ml顺铂前药的溶液，随后取180～220μl聚乙二醇-b-聚(2-(二异丙基氨基)乙基甲基丙烯酸酯溶液、10～20μl顺铂前药溶液、8～12μl浓度为0.8～1.2nmol/ul siRNA水溶液，与45～55μl浓度为8～12mg/ml的阳离子脂质体G0C14溶液混合，在搅拌条件下，逐滴加入到4～6ml去离子水中形成纳米粒子；随后将该溶液转移至超滤膜中，离心得到上层均质溶液，用去离子水洗涤后，收集纳米粒子即为同时载有siRNA和顺铂前药的新型酸敏纳米载体。

7.根据权利要求6所述的载有siRNA和顺铂前药的纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)所得的纳米粒子最后分散到磷酸缓冲盐溶液中。

8.由权利要求6或7所述的制备方法制备得到的载有siRNA和顺铂前药的纳米材料。

9.权利要求8所述的载有siRNA和顺铂前药的纳米材料在肿瘤治疗中的应用。