[发明专利]一种鸭共刺激分子CD40的编码基因及其应用

说明书

本发明公开了一种鸭共刺激分子CD40的编码基因及其应用，属于生物技术领域。该编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示，其编码的蛋白由171个氨基酸残基组成，其氨基酸序列如SEQ ID No：2所示，所述的蛋白分子形成1个胞外肿瘤坏死因子受体结构域、一个跨膜结构域和一个胞内结构域，是一种18.8kD的I型跨膜糖蛋白。本发明提供的鸭共刺激分子CD40的CDS全序列在相关检测试剂盒研发中具有较大的实际意义，其抗病毒功能在水禽疾病防治中有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鸭共刺激分子CD40的 编码基因及其应用。

背景技术

鸭是一种具有重要经济价值的水禽。在其生长发育过程中，容易 受到各种病害的侵害，其中以病毒性危害最为严重。目前最常见的侵 害鸭的病毒有鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭坦布苏病毒等等。由于病毒 是严格的专性寄生物，至今还没有严格选择性的药剂能有效地用于动 物病毒病的防治。在生产实践中主要以清除毒源、切断病毒的传播途 径和研发生产不同的疫苗等预防性措施来控制病毒病的危害，其中以 研发生产针对特定病原的疫苗最为经济有效。

共刺激分子可以作为新型免疫佐剂，增强疫苗的免疫保护作用， 为研发出更有效的抗病毒疫苗提供了强有力的后盾。共刺激分子是可 以将信号传导到细胞中，以正(共刺激)或负(共抑制)调节免疫应 答的细胞表面分子。根据经典的“双信号模型”，T细胞受体(Tcell receptor，TCR)或B细胞受体(B cell receptor，BCR)识别抗原提供对 免疫应答具有特异性的第一信号；抗原呈递细胞(Antigen presenting cell，APC)上的受体与淋巴细胞上相应的配体结合产生第二信号，该 信号促进细胞因子分泌和效应子功能。在不存在第二信号的情况下， 淋巴细胞功能失活，不能对随后的抗原暴露作出反应。因此，共刺激 信号是决定T/B细胞能够对特异性抗原有能力应答并最终介导适当 的免疫应答的关键因素。共刺激分子强大的生物学功能使它们在生物 学、临床和治疗的领域得到了广泛的研究。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种鸭共刺激分子CD40的CDS序列， 及其在相关检测试剂盒和水禽疾病防治中的应用。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种鸭共刺激分子CD40的编码基因，所述的编码基因具有SEQ ID No：1所示的核苷酸序列。

所述的编码基因编码的蛋白也在本发明的保护范围之内，所述的 蛋白由171个氨基酸残基组成，其氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。

所述的蛋白形成1个胞外肿瘤坏死因子受体(Tumor necrosis factorreceptor，TNFR)结构域、一个跨膜结构域和一个胞内结构域， 是一种18.8kD的I型跨膜糖蛋白。

在本发明的另一方面，一种含有鸭CD40重组蛋白编码基因的重 组表达载体，所述的重组表达载体是将氨基酸序列如SEQ ID No.2所 示的鸭CD40重组蛋白编码基因克隆入原核表达质粒pET28a(+)中而 得到。

在本发明的另一方面，一种工程菌，所述的工程菌是将上述重组 表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中而得到。

另外，本发明还提供了上述鸭CD40重组蛋白的制备方法，包括 以下步骤：将工程菌接种于含卡那霉素(Kan)的LB液体培养基中，37℃培养过夜，次日取菌液按体积比1:100接入含Kan的LB液体培 养基中，37℃振荡培养至OD₆₀₀＝0.4，加入IPTG至终浓度为0.2mmol/L，37℃诱导培养6小时，收集菌液，离心，沉淀用pH8.0的 Tris-HCl缓冲液悬浮，冰浴条件下超声波间歇破碎菌体，离心，沉淀 用含有8mol/L尿素的PBS溶解，再用切胶纯化蛋白方法纯化，即得 鸭CD40重组蛋白。

在本发明的另一方面，以鸭CD40重组蛋白为抗原免疫动物得到 的多克隆抗体。