[发明专利]25-羟基维生素D3

说明书

本发明涉及25‑羟基维生素D₃生产菌株及其筛选方法与应用，属于生物工程技术领域。所述25‑羟基维生素D₃生产菌株的保藏编号为：CCTCC M 2019385，保藏日期为：2019年5月23日。上述菌株可应用于高效转化底物维生素D₃合成25‑羟基维生素D₃。经本发明筛选出的菌株转化维生素D₃效率高，易培养，易于工业化放大。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，尤其是涉及25-羟基维生素D₃生产菌株及其筛选方法与应用。

背景技术

25羟基维生素D₃(以下简称25OH-VD₃)，维持和调节机体钙磷的正常代谢,促进钙、磷的吸收，维持血钙、血磷水平,保持骨骼的正常生长发育,临床上用于治疗佝偻病、软骨症等疾病。在养殖业中，25OH-VD₃可以促进骨骼的发育，提高肉鸡增重速度、增强饲料转化效率、降低死淘率、改善肌肉嫩度、提高加工性能和产肉率。

目前，25OH-VD₃的生产工艺主要有化学合成法、光照射法，化学反应步骤繁琐、需要卤素试剂、反应过程中产生外消旋体，分离难度大。其中卤素化合物的残留不容忽视。光化学照射法原料为25-羟基-7-去氢胆固醇，但是该化合物同样需要多步化学反应获取，来源受限。而生物转化法可以很好的避免污染环境、中间试剂残留等问题，由于25OH-VD₃相当比例地应用于饲料和医药行业，从生物转化法产生的25OH-VD₃更具有市场潜力。

微生物转化法利用的菌株主要包括有链霉菌属、红球菌属、分枝杆菌属、诺卡氏菌属等。Sasaki及其同事(Sasaki等，1991)筛选了约300个链霉菌属菌株，发现两种菌株的转化生产率约为7.0mg/L/min。Yasutake等用Nisin处理的含有VdhT107A的红球菌细胞可以合成573mg/L 25OH-VD₃(Yasutake等，2013)。Luo等人筛选获得菌株Pseudonocardiaautotrophica CGMCC5098，并使用全细胞系统在120小时内，以维生素D₃(以下简称VD₃)为底物合成639mg/L25OH-VD₃，是迄今为止微生物合成25OH-VD₃最高报道(Luo等，2007)。然而这些菌株培养周期长，会引发生产成本居高不下。

细菌属转化VD₃鲜有报道，细菌属生长培养基配方简单、生长迅速、培养周期短，对环境的适应性强，因而更易于工业放大。

发明内容

本发明的目的是提供一种25OH-VD₃生产菌株及其筛选方法及利用该菌株转化VD₃获取25OH-VD₃。

根据本发明的一个方面，本发明提供一株25OH-VD₃生产菌株，命名为zju4-2，分类名为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，保藏机构为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2019385，保藏时间为2019年5月23日，拉丁学名为Bacillus cereus。

根据本发明的另一个方面，本发明提供一种25OH-VD₃生产菌株的筛选方法，其特征在于，从化工厂附近深土层取土样，加入无菌水中制备菌悬液，吸取菌悬液接种于富集培养基，培养后稀释涂布于分离培养基平板，挑取不同形态的代表性单菌落至种子培养基培养，再转接至转化培养基中进行转化实验，萃取转化液用于高效液相色谱检测25-羟基维生素D₃的浓度，从而筛选得到所述25-羟基维生素D₃生产菌株。